【摘 要】
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目的:养羊业是新疆畜牧业的优势产业,随着发展多胎母羊且产羔数量的增加,以多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌以及绵羊肺炎支原体等为主的细菌性病原导致的呼吸道感染性疾病日渐增多。同时证实这些细菌也存在于部分健康绵羊呼吸道,而这些细菌与导致感染的病原菌之间有何异同还不得而知。因此本研究拟从新疆南北疆8个规模化养殖场采集绵羊鼻拭子样品,应用PCR技术检测样品中多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体核酸
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目的:养羊业是新疆畜牧业的优势产业,随着发展多胎母羊且产羔数量的增加,以多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌以及绵羊肺炎支原体等为主的细菌性病原导致的呼吸道感染性疾病日渐增多。同时证实这些细菌也存在于部分健康绵羊呼吸道,而这些细菌与导致感染的病原菌之间有何异同还不得而知。因此本研究拟从新疆南北疆8个规模化养殖场采集绵羊鼻拭子样品,应用PCR技术检测样品中多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体核酸阳性率;同时采用常规细菌分离鉴定方法对PCR阳性鼻拭子进行相应细菌的分离鉴定,阐明新疆部分规模化羊场多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌的血清型、MLST分型、致病性和耐药性特点,为绵羊呼吸道疾病的防控及溯源奠定基础。方法:（1）现场流行病学调查:采用现场询问、记录检索、实地了解相关情况等对新疆南北疆8个养殖场进行现场流行病学调查;基于三种菌特异性基因kmt、lkt、movi的PCR方法检测样品中多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体的核酸。（2）采用实验室常规方法从PCR阳性鼻拭子中分离鉴定多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌;采用PCR方法对分离的多杀性巴氏杆菌进行荚膜分型、脂多糖分型及MLST分型,对溶血性曼氏杆菌进行血清分型及MLST分型;（3）采用PC R方法和微量肉汤稀释法对分离菌株相关毒力基因、耐药基因以及耐药表型进行检测分析。结果:（1）从新疆南北疆8个规模化养殖场采集的290份鼻拭子中,检测发现其中18份鼻拭子多杀性巴氏杆菌核酸阳性,阳性率为6.21%,194份鼻拭子溶血性曼氏杆菌核酸阳性,阳性率66.43%,177份鼻拭子绵羊肺炎支原体核酸阳性,阳性率61.06%。（2）从18份多杀性巴氏杆菌核酸阳性鼻拭子中分离到28株多杀性巴氏杆菌,194份溶血性曼氏杆菌核酸阳性鼻拭子中分离到14株溶血性曼氏杆菌;新疆部分地区绵羊呼吸道分离的多杀性巴氏杆菌主要荚膜血清型:脂多糖血清型为D:L3,ST型有ST1、ST19、ST20、ST181,其中ST181为主型。溶血性曼氏杆菌血清型有A1、A2、A6型,ST型有ST16、ST28、ST46,其中ST16为主型。（3）28株多杀性巴氏杆菌中exb B、exb D、sod C、oma87基因携带率为100%,未检测到nan H、plp E、ptf A、hgb B等毒力基因;14株溶血性曼氏杆菌dna N、gap A、fbp A、gs60、LKT-C毒力基因的携带率为100%,未检测到plp B、ton B、ptf A、fim A基因。多杀性巴氏杆菌对复方新诺明、阿米卡星、卡那霉素耐药,耐药率分别为50.00%、33.33%、16.67%,对庆大霉素中介,中介率为16.67%,对其他抗生素敏感;溶血性曼氏杆菌对阿米卡星中介,中介率为16.67%,对其他抗生素敏感。耐药基因检测结果显示,28株多杀性巴氏杆菌和14株溶血性曼氏杆菌均未检测到本研究涉及的相关耐药基因。结论:新疆南北疆部分绵羊呼吸道多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌和绵羊肺炎支原核酸阳性检出率较高;多杀性巴氏杆菌荚膜血清型、脂多糖型多为D:L3,MLST型有4种;溶血性曼氏杆菌血清型以A2型为主,MLST型有3种。溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌携带丰富的毒力因子基因,对大部分抗生素敏感,未检测到相关的耐药基因,结果为有效防控三种细菌感染及溯源奠定坚实基础。
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