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目的:球虫病是目前危害养禽业最严重的疾病之一,严重限制养禽业的发展,球虫病的控制主要基于饲料中添加抗球虫化学类药物和抗生素,但抗药性和动物产品药物残留的问题导致学者寻找新的有效和更安全的替代品。中药治疗虫积在我国有悠久的历史且中药资源丰富,对中草药的开发一直是国内研究热点。本课题以新疆黄羽肉鸡为研究对象,旨在探究抗球虫中药作用对柔嫩艾美耳球虫E.tenella致肉鸡血便后肠神经胶质细胞(EGCs)分布数量的变化以及Cx43、iNOS在鸡肠道表达的影响,以期为鸡球虫病的防治提供参考依据。方法:1.建立雏鸡E.tenella人工感染模型,分别将1×10~4、2.5×10~4、5×10~4、7.5×10~4个/只E.tenella孢子化卵囊经口灌服于14日龄雏鸡,并设置对照组,记录各组雏鸡灌服卵囊后的临床症状、血便记分等指标,确定合适的感染剂量。2.当雏鸡饲养至12日龄时,检查其粪便,观察粪便中是否有球虫卵囊,若无球虫卵囊,选取体重大致相近的健康雏鸡100只,随机分为5组,于14日龄,除阴性对照组外其他组雏鸡均灌服含2.5×10~4个孢子化卵囊的生理盐水1 ml,灌服虫卵后每天观察鸡的健康情况,当鸡出现血便、食欲减退,鸡冠和可视粘膜贫血、苍白等症状时开始给药治疗。试验组A是感染组,灌服含2.5×10~4个孢子化卵囊的生理盐水1 ml;试验B是对照组,不感染不治疗;试验组C是中药I组,灌服含2.5×10~4个孢子化卵囊的生理盐水1 ml并将中药I以5 g/kg的剂量混于饲料中给药;试验D是中药II组,灌服含2.5×10~4个孢子化卵囊的生理盐水1 ml并将中药II以5 g/kg的剂量混于饲料中给药;试验E是SQ组,灌服含2.5×10~4个孢子化卵囊的生理盐水1 ml并按照磺胺喹恶啉钠的剂量混于水中给药。各组均自由饮用高温灭菌水,在感染后每日观测鸡只健康情况,在第8 d每组宰杀5只,取肠组织样保存于Helly固定液、10%中性甲醛固定液以及-80℃冰箱中,分别用于改良的Holzer染色、免疫组织化学染色以及ELISA检测法。结果:1.建立雏鸡E.tenella人工感染模型的接种剂量为2.5×10~4个孢子化卵囊/只。2.改良的Holzer染色结果表明对照组EGCs广泛分布于肠道各段的黏膜层、黏膜下层和肌层,而外膜则零星分布,在固有层中以靠近肠绒毛顶端处聚集成群,其余部位散在分布。感染组的十二指肠、空肠、回肠EGCs数量与对照组差异不显著(P>0.05),主要的分布变化表现在盲肠中,对照组的EGCs在绒毛上皮间数量较多,在黏膜固有层、黏膜肌层、肠腺周围、黏膜下层和肌层分布的数量多。感染组的EGCs分布与对照组相比,黏膜上皮间的数量明显下降,而肠腺周围稀少,肌层亦仅有少量分布。感染组盲肠EGCs数量与对照组相比显著下降(P<0.05),中药I组、SQ组盲肠的EGCs数量与对照组相比显著下降(P<0.05),而与感染组相比显著升高(P<0.05),中药II组盲肠EGCs数量与对照组差异不显著(P>0.05)。3.ELISA的试验结果为感染组盲肠内Cx43的含量低于对照组且差异显著(P<0.05);中药I组和SQ组之间差异不显著(P>0.05),两组Cx43的含量显著低于对照组(P<0.05),但高于感染组(P<0.05);中药II组盲肠Cx43的含量与对照组差异不显著(P>0.05)。感染组回肠和盲肠内iNOS的含量显著高于对照组(P<0.05);中药I组和SQ组之间差异不显著(P>0.05),两组盲肠内iNOS的含量显著高于对照组(P<0.05),但低于感染组(P<0.05);中药II组盲肠iNOS的含量与对照组差异不显著(P>0.05)。4.免疫组织化学法试验结果表明,Cx43主要表达于对照组的黏膜上皮、肠腺、黏膜下层、固有层和肌间神经丛中,各试验组的小肠Cx43的表达与对照组相似,但感染组盲肠的Cx43的表达显著低于对照组(P<0.05);中药I组和SQ组之间盲肠的Cx43的表达无显著差异(P>0.05),两组盲肠的Cx43显著低于对照组(P<0.05),高于感染组(P<0.05);中药II组盲肠Cx43的表达与对照组差异不显著(P>0.05)。iNOS在对照组呈弱表达,感染组、中药I组、中药II组、SQ组的小肠iNOS的亦呈弱表达。但在盲肠组织中,与对照组相比,感染组盲肠iNOS主要表达于肠腺、黏膜上皮和肠绒毛固有层,其表达显著上调(P<0.05);中药I组和SQ组之间盲肠的iNOS的表达差异不显著(P>0.05),两组盲肠的iNOS的表达显著高于对照组(P<0.05),低于感染组(P<0.05);中药II组盲肠iNOS的表达与对照组差异不显著(P>0.05)结论:建立E.tenella感染模型的接种剂量为2.5×10~4个孢子化卵囊/只;雏鸡感染E.tenella后盲肠内的EGCs分布发生变化,数量明显减少,破坏了盲肠EGCs网络屏障,中药复方制剂II(球虫清)能显著提高雏鸡感染E.tenella后盲肠EGCs的数量;中药可以促进肠道分泌Cx43,减少肠道分泌iNOS,一定程度上抑制E.tenella的致病性,并对肠黏膜有一定的保护作用。