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目的:采用大鼠CCL4致肝纤维化模型,运用ELISA、荧光定量PCR和Western blot等方法研究三叶香茶菜如何调控TLR4/NF-κB/NLRP3信号传导通路,达到抗肝纤维化作用。方法:1.采集三叶香茶菜根块,品种鉴定,切片,采用水提醇沉法提取,浓缩成浸膏,即为实验样品;2.实验动物分组:SPF级SD大鼠96只,雌雄各半,体重180-200g,随机分为6组,即空白组、模型组、阳性组(秋水仙碱组)、三叶香茶菜高、中、低剂量组,每组16只。3.造模与药物处理:除空白组外,其余各组大鼠均给予皮下注射40%CCL4混合油溶液,每次剂量为3ml/kg(首剂给予5ml/kg),2次/周,连续注射12周,实验过程中自由饮食。空白组与上述各组于造模4周后每日灌服生理盐水、生理盐水、秋水仙碱(1mg/kg)、三叶香茶菜组按80g/kg、40g/kg、20g/kg灌胃给药(按生药量计),连续8周,实验时间共12周,取血、肝脏检测相应指标;4.指标测定:1)生化法检测血清或肝组织AST、ALT、HYP、SOD、MDA的含量。2)酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清LN、HA、C-IV型胶原、PC-III型胶原、TGF-β1、α-SMA、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18、Caspase-1的表达。3)运用实时荧光定量PCR法检测肝组织内的TLR4、IκB-α、NF-κBp65、NLRP3 m RNA表达。4)运用Western blot技术检测肝组织内的TLR4、NF-κBp65、P-IκBα、NLRP3蛋白的表达。结果:1.模型组大鼠血清ALT、AST活力水平较空白组的活力水平显著增高,具有显著性差异(P<0.01);与模型组相比,阳性组、三叶香茶菜高剂量组、中剂量组ALT、AST活力水平有显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.与空白组相比,模型组大鼠血清HA、LN、C-IV型胶原、PC-III型胶原表达均显著升高,均有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比,阳性组、三叶香茶菜高、中、低剂量组可显著降低肝纤维化大鼠血清中HA、LN、PC-III型胶原、C-IV型胶原表达水平,差异具有统计学意义(P<0.01)。3.与空白组相比较,模型组大鼠肝组织中HYP的表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比较,阳性组、三叶香茶菜中剂量组、低剂量组明显降低大鼠肝组织中HYP的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。4.模型组大鼠血清中的MDA水平与空白组相比较显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,阳性组、三叶香茶菜高剂量组、中剂量组可显著降低大鼠血清中MDA水平,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与空白组相比较,模型组大鼠血清中的SOD水平降低,具有显著性差异(P<0.05);与模型组相比较,阳性组及三叶香茶菜低剂量组大鼠血清中SOD的水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.与空白组比较,模型组大鼠血清中α-SMA、TGF-β1表达显著升高,均具有显著性差异(P<0.01)。与模型组比较,阳性组、三叶香茶菜高剂量组、中剂量组、低剂量组大鼠血清的α-SMA水平呈显著下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,阳性组、三叶香茶菜高、中剂量大鼠血清中TGF-β1表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。6.与空白组相比较,模型组大鼠血清中IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α、Caspase-1表达显著升高,均有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比较,阳性组、三叶香茶菜高剂量组、中剂量组、低剂量组明显降低大鼠血清IL-6、IL-1β、IL-18、Caspase-1的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,阳性组、三叶香茶菜中剂量组大鼠血清中TNF-α表达水平可显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。7.模型组大鼠肝组织TLR4、NF-κBp65、NLRP3m RNA的表达高于正常组大鼠,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,给药处理后,阳性组、三叶香茶菜高、中、低剂量组显著下调肝组织中TLR4、NF-κBp65、NLRP3m RNA的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.01)。模型组大鼠肝组织IκB-αm RNA的表达低于正常组大鼠,差异具有统计学意义(P<0.01),给予药物处理后,三叶香茶菜治疗组均能显著上调肝组织IκB-αm RNA的表达,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。8.模型组大鼠肝组织中TLR4、NF-κBp65、p-IκBα、NLRP3蛋白的相对表达量显著高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比较,三叶香茶菜中剂量组能显著下调肝组织中TLR4、P-IκBα蛋白的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,阳性组、三叶香茶菜高、中、低剂量组能够显著下调肝组织中NF-κBp65、NLRP3蛋白的表达,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:本研究显示三叶香茶菜抑制TLR4、NF-κB、NLRP3基因表达,上调IκBα基因表达,抑制IκBα蛋白磷酸化,抑制Caspase-1、IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α的表达,明显改善大鼠肝组织的病理损害及肝组织纤维化。表明三叶香茶菜抗肝纤维化作用机制是抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路活化,从而下调炎症因子的表达与释放,抑制肝脏炎症损伤,从而达到抗肝纤维化的作用。