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目的:原发性高血压是最常见的危害人类健康的心血管疾病,在全球范围内高血压的患病率逐年增加,严重地影响着人类的健康。原发性高血压是由遗传和环境因素共同作用而引起的复杂性疾病,寻找原发性高血压的致病相关基因和危险因素对高血压的防治具有重要意义。本研究对锡林郭勒盟的蒙古族和汉族原发性高血压的易感因素进行研究,采用tagSNP的方法在锡林郭勒盟的蒙古族和汉族人群中分别对离子通道基因-噻嗪类敏感的氯化钠共转运体(thiazide-sensitive Na-Cl cotransporter,TSC)基因和肾脏氯离子通道Kb(chloridechannel Kb,CLCNKB)基因的多态性进行分析,以期阐明离子通道基因(TSC和CLCNKB)突变和锡林郭勒盟蒙古族、汉族原发性高血压的关系,及其在原发性高血压发病机制中的作用。本研究从遗传学角度剖析两群体高血压患病的原因,为锡林郭勒盟蒙古族、汉族原发性高血压的防治提供科学依据。
方法:
1.以横断面调查的方法对内蒙古锡林郭勒盟多伦县2个乡、二连浩特市1个苏木和东乌珠穆沁旗3个苏木进行流行病学调查,共采集样本938例,其中蒙古族414例,包括高血压患者177例,正常血压者237例；汉族524例,包括高血压患者285人,正常血压者239例。
2.使用Haploview软件对少见等位基因频率(minor allele frequency,MAF)≥0.05,r2≥0.5的常见SNP位点进行筛选,根据block选择tagSNP。采用连接酶检测反应(ligase detection reaction,LDR)技术分别对入选样本进行基因分型。
3.选择目前公认研究较多的CLCNKB基因T481S和TSC基因Gln904Arg的高频多态位点,应用TaqMan技术进行高通量基因分型。
4.在锡林郭勒盟的蒙古族和汉族人群,分别探讨单个SNP位点及其构成的单体型与原发性高血压的相关性,并了解离子通道基因(TSC和CLCNKB)多态性在两民族群体中的分布情况。
5.借助SPSS软件进行统计学处理。用X2检验以确认是否符合Hardy-Weinberg平衡和进行两组间等位基因频率和基因型频率比较。高血压组和正常血压组临床表型计量资料采用中位数±四分位数间距表示,组间比较采用Wilcoxon秩和检验；高血压与各相关因素的分析采用Logistic逐步回归。同时运用SHEsis软件在线分析多个位点之间的连锁不平衡(linkage disequilibrium,LD)关系,Haploview软件用于单体型模块判定和的tagSNP的选取,应用SHEsis软件进行多态位点单体型的构建和分析。
结果:
1.在锡林郭勒盟蒙古族和汉族两群体中,高血压组超重者即体质指数(BMI)高者明显多于正常血压组；血浆总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白(HDL-C)的水平在高血压组和正常血压组之间差异有统计学意义(P<0.05)；高血压组吸烟率亦明显多于正常血压组(P<0.05)。
2.根据block选择tagSNP,从TSC因的常见SNPs中筛选出9个tagSNP,他们分别是rs6499858,rs2289119,rs13306673,rs2010501,rs7188995,rs7204044,rs4784733,rs8063406和rs2304478,从CLCNKB基因的常见SNP中挑选出2个tagSNP,他们分别是rs945393和rs10803414。
3.单个SNP位点关联分析显示:在蒙古族群体中,TSC基因rs7204044等位基因频率分布在高血压组和正常血压组之间差异有统计学意义；在加性模型和隐性模型中,rs7204044的基因型频率分布在高血压组和正常血压组之间差异有统计学意义。在汉族群体中,rs7204044和rs13306673等位基因频率分布在高血压组和正常血压组之间差异均有统计学意义；在加性模型和隐性模型中,rs7204044和rs13306673的基因型频率在高血压组和正常血压组之间差异均有统计学意义。其余SNP位点的基因型频率和等位基因频率在高血压组和正常血压组之间比较差异均无统计学意义。
4.单个SNP位点关联分析显示:在蒙古族人群中,CLCNKB基因的rs10803414的较少等位基因频率分布在高血压组和正常血压组之间差异有统计学意义:在加性模型和隐性模型中rs10803414的基因型频率在高血压组和正常血压组之间差异均有统计学意义。在汉族人群的显性模型中,rs945393的基因型频率分布在高血压组和正常血压组之间差异有统计学意义。其余SNP位点的基因型频率和等位基因频率在高血压组和正常血压组之间差异均无统计学意义。
5.分别对TSC基因的9个多态位点做配对连锁不平衡分析,在蒙古族人群中,其中只有3个多态位点rs2289009,rs13306673和rs7204044存在强的连锁不平衡(D’>0.8),单体型关联分析结果显示这3个多态位点共构成4种频率超过3％的常见单体型,单体型GCA的频率在高血压组和正常血压组之间差异有统计学意义。在汉族人群中,同样有3个多态位点rs7188995,rs7204044和rs2304478存在强的连锁不平衡,单体型关联分析结果显示这3个多态位点共构成2种频率超过3％的常见单体型,单体型TGG和TGA的频率在高血压组和正常血压组之间差异均有统计学意义。
6.对CLCNKB基因的2个多态位点做配对连锁不平衡分析,在蒙古族人群中,rs10803414和rs945393共构成4种频率超过3％的常见单体型,单体型CC的频率在高血压组和正常血压组之间差异有统计学意义。在汉族人群中,rs10803414和rs945393共构成4种频率超过3％的常见单体型,各种单体型在高血压组和正常血压组之间差异均无统计学意义。
结论:
1.在加性模型和隐性模型中,TSC基因的rs7204044多态性和锡林郭勒盟蒙古族、汉族原发性高血压均具有相关性；rs13306673多态性和汉族原发性高血压具有相关性。而多位点单体型分析结果提示:TSC基因构成的单体型GCA和蒙古族原发性高血压相关,携带单体型GCA的个体形成高血压的风险明显降低。TSC基因构成的单体型TGG和汉族原发性高血压有相关性,携带单体型TGG的个体形成高血压的风险会明显增加；TSC基因构成的单体型TGA和汉族原发性高血压有相关性,携带单体型TGA的个体形成高血压的风险会明显降低。
2.在加性模型和隐性模型中,CLCNKB基因rs10803414多态性和锡林郭勒盟蒙古族原发性高血压具有相关性。在显性模型中,CLCNKB基因rs945393多态性和汉族原发性高血压具有相关性。而多位点单体型分析结果提示:CLCNKB基因构成的单体型CC和蒙古族原发性高血压有相关性,携带单体型CC的个体形成高血压的风险会明显增加。