背景及目的:子宫内膜癌为危害女性健康的女性生殖道常见三大恶性肿瘤之一,近年来发病率有明显上升趋势。在欧美等某些发达国家,其发病率已高居女性生殖道恶性肿瘤之首。“无孕激素对抗的雌激素的长期刺激”是子宫内膜癌发病的常见原因之一,但雌激素致子宫内膜癌的具体作用机制目前尚不清楚。传统的观点认为,雌激素与其受体结合后在细胞核通过“基因组转录效应”来发挥作用,该过程往往需要数小时才会增加蛋白的合成,故又称为长期效应。最近的研究发现,雌激素还具有生长因子样的“非基因组转录效应”,与膜受体结合后可以快速引发一系列的下游信号转导事件。这些快速效应通常数分钟或数十分钟便可产生,无法用经典的基因组转录学说来解释,我们称之为雌激素的快速效应,或非基因组转录效应。研究已经证实,雌激素可激活子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/Akt信号转导通路,从而促进子宫内膜癌细胞的生长。雌激素是否可激活子宫内膜癌细胞丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路,从而促进子宫内膜癌细胞的增殖,国内鲜见报道。P21ras蛋白是由原癌基因ras编码的分子量为21KD的膜结合型表达蛋白,也是MAPK信号转导通路中的主要成员。P-ERK是细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）的活性形式,ERK是MAPK家族中的一类脯氨酸导向的丝/苏氨酸蛋白激酶,正常定位于胞浆,激活后形成P-ERK,转位至胞核,产生细胞效应。其可磷酸化转录因子,启动一些即早基因的表达如c-jun和c-fos等,诱导cyclinD1和c-myc等癌基因表达,cyclin D1的表达促使细胞由G₁期向S期转化,最终导致细胞恶性增殖。此外,P-ERK还可以上调cyclinE的表达,并灭活细胞周期抑制蛋白P27^KIP,从多个水平调节细胞凋亡,促进肿瘤的发生发展。因此,本课题以雌激素受体阳性的Ishikawa和雌激素受体低表达的HEC-1A细胞为研究对象,研究了雌激素对P21ras和P-ERK的活化及对细胞增殖、周期的影响,初步探讨了雌激素通过“非基因组转录效应”对MAPK通路活化,从而为子宫内膜癌的治疗提供理论依据。材料与方法:1、材料:人子宫内膜癌细胞系Ishikawa来源于人子宫内膜高分化腺癌,雌激素受体（ER）阳性,HEC-1A来源于美国ATCC细胞库,ER低表达,均由北京大学人民医院妇科实验室魏丽惠教授惠赠。细胞置于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,于37℃、5%CO₂培养箱中培养,均贴壁生长,根据细胞生长状态每1～3天换液或传代。2、方法:（1）运用MTT法检测不同浓度的E₂(空白对照,10^-10mol/L、10^-8mol/L、10^-6mol/L和10^-4mol/L)作用于Ishikawa和HEC-1A细胞不同时间（24h,48h,72h）后细胞的吸光度值的变化。（2）应用流式细胞技术检测不同浓度的E₂(空白对照,10^-8mol/L和10^-6mol/L)作用于Ishikawa和HEC-1A细胞相同时间24h后细胞的增殖周期的改变。（3）应用免疫细胞化学检测子宫内膜癌细胞中P21ras和P-ERK的活性,观察浓度为10^-6mol/L的E₂分别作用于2种细胞不同时间（空白对照,5min,15min,30min,1h,2h）后,得出最佳活化时间;不同浓度的E₂(空白对照,10^-10mol/L、10^-8mol/L、10^-6mol/L和10^-4mol/L)分别作用于2种细胞的最佳时间,分析P21ras和P-ERK的时间效应,浓度效应,两者之间的相关性及与ER的关系。3、采用SPSS13.0软件统计,细胞吸光度值和细胞周期的结果用单因素方差分析,P21ras和P-ERK比较用t或t’检验,P21ras和P-ERK与ER的相关性采用Spearman相关分析,以P<0.05为有统计学意义。结果:1、随着E₂浓度增加,Ishikawa细胞的增殖活性呈时间依赖性（F≥32.93,P≤0.001）,细胞周期中G₀-G₁期比例下降（F=54.552,P≤0.001）,S期比例升高（F=40.88,P=0.000）;HEC-1A细胞的增殖活性及细胞周期各期比例变化不显著（p均>0.05）。2、检测P21ras和P-ERK的活化水平中,10^-6mol/L的E₂作用于Ishikawa细胞30min时P21ras和P-ERK的活化最显著（74.00±2.5495,68.00±4.8166）,作用于HEC-1A细胞15min时,P21ras和P-ERK即有明显激活而且达到高峰（78.00±3.1623,74.00±2.3022）。随着E₂浓度增加2种细胞中P21ras和P-ERK表达均逐渐增加,呈浓度依赖性的特点。3、不同时间,不同浓度E₂作用下,2种子宫内膜癌细胞中P21ras和P-ERK之间均呈正相关（r≥0.049,p≤0.027,r≥0.047,p≤0.036）,P21ras,P-ERK两种蛋白在ER（+）的Ishikawa和ER低表达的HEC-1A细胞中的表达均呈负相关（r≤-0.049,p≤0.030,r≤-0.048,p≤0.032）。结论:1.E₂可以促进子宫内膜癌Ishikawa（ER+）细胞增殖和周期的进展,而对ER低表达的HEC-1A细胞增殖作用不显著,可能是由与两种细胞内ER水平不同,在ER（+）的Ishikawa细胞,E₂可以通过转录和非转录两种机制来影响细胞的增殖状态和周期进展,而在HEC-1A细胞,E₂仅能通过非转录效应一种机制来产生效应。2.E₂可以迅速促进子宫内膜癌细胞中P21ras和P-ERK的活化,并呈浓度依赖性且两种蛋白表达之间呈正相关,提示E₂可能以浓度依赖性的特点通过“非基因组转录”途径迅速激活MAPK通路促进子宫内膜癌的进展。3.P21ras、P-ERK与ER的表达呈负相关,考虑雌激素核受体和膜受体可能竞争与E₂结合,减弱了E₂通过膜受体以“非基因组转录”途径迅速激活MAPK通路的效应,为阻断信号转导通路治疗子宫内膜癌提供了新的靶点。