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透明质酸亦称玻璃酸(hyaluronic acid),简称HA,是广泛存在于动物结缔组织内的一种高分子物质,相对分子质量可达数百万,属于酸性粘多糖类,由N-乙酰氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸二糖单位重复交替连接而成。由于特殊的生理作用、独特的流变学特性和极强的持水保湿能力,透明质酸在医学研究、临床治疗、化妆品工业、食品添加剂等领域有广泛的应用。
从动物组织中提取HA常用的原料有鸡冠、脐带、眼玻璃体和猪皮等,主要工艺过程包括脱水、磨碎、浸泡、提取、除杂、沉淀和分级分离。不同组织HA的提取纯化过程有一定差别。鸡冠中脂肪成分少,HA含量高,容易绞碎,经丙酮脱脂后直接用蒸馏水提取,提取液用胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解后,用氯代十六烷基吡啶(CPC)反复沉淀3次,最后用乙醇沉淀,并干燥后得到产品。
本研究对酶解工艺参数进行了优化。实验考察了酶解时间、胃蛋白酶和胰蛋白酶用量、溶液pH值和酶解温度对透明质酸提取量和质量的影响,确定最佳酶解条件为:酶解时间2 h,胃蛋白酶用量30 g/kg,胰蛋白酶用量3 g/kg,溶液pH8.5,胰蛋白酶酶解温度45℃。同时,还对不同酶解条件下得到的透明质酸进行了分子量分布测试,结果表明,酶解条件对HA分子量分布有一定影响,但不十分显著。
与其它透明质酸的动物组织提取法相比,鸡冠提取法具有原料来源广泛、提取工艺简单、操作性强等优点,因此该提取方法是可行的。