植物乳杆菌SHY21-2的细菌素分离纯化及特性研究

来源 :西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lleii
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
食品生产加工及贮藏过程的微生物安全问题一直是食品产业长期的关注焦点。化学防腐剂是目前常用的防腐手段,但随着消费者对高品质食品需求的增加,化学防腐添加剂的潜在危害得到越来越多的关注。因此,食品微生物安全的生物防控技术研发是未来的一个重要发展方向,细菌素作为天然、安全抑菌因子是发展的方向之一。目前,工业化使用的细菌素只有Nisin一种,但Nisin抗菌谱窄,不能抑制革兰氏阴性菌、酵母菌。因此寻找一种高效的、广谱的细菌素具有重要意义。本研究以泡菜、曲拉和牦牛酸奶等传统发酵食品中分离的乳酸菌为研究对象,从其中筛选出高产广谱细菌素菌株作为目标,优化细菌素纯化工艺,发现了新细菌素plantaricin LP21-2,探讨了该细菌素的部分特性。实验方法和主要结论如下:(1)产细菌素乳酸菌的筛选和鉴定从本实验保藏的28株菌中,通过琼脂扩散法筛选出对金黄色葡萄球菌ATCC25923抑菌效果最佳的菌。测定菌株48h内的生长曲线和细菌素随着时间变化的产量。筛选出的菌株上清液中加入硫酸铵沉淀进行分级沉淀,并检测沉淀物质的抑菌活性。通过形态学鉴定、API lab plus系统和16S r DNA序列对筛选出的菌株进行鉴定。结果发现菌株SHY21-2对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最强,在培养26h时细菌素的产量达到峰值,在加入80%的硫酸铵时沉淀出大部分细菌素。经鉴定,菌株SHY21-2是植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。并将其所产的细菌素命名为plantaricin LP21-2,简写为LP21-2。(2)细菌素的纯化及理化性质分析对菌株SHY21-2的发酵上清液进行细菌素分离纯化,并经过LC-MS/MS分析其氨基酸序列,通过APD数据库比对细菌素序列进行鉴定。纯化细菌素在60℃、80℃和100℃下分别处理10和30min,121℃处理15min后测定其抑菌活性,并分析其不同酸碱环境中和蛋白酶水解后抑菌活性。结果发现LP21-2可由菌株SHY21-2的发酵上清液经过硫酸铵粗提,葡聚糖凝胶G-10脱盐,阳离子交换色谱,凝胶柱superdex-200 10/300 GL纯化;最终通过R-HPLC的分析和分离获得。LP21-2分子量为1362.84Da,氨基酸序列为RPNEPRLLLPR,疏水氨基酸含量27%,分子式为C60H106N20O15。plantaricin LP21-2是一种新型的细菌素,其抑菌活性经高温处理没有显著下降,最适p H值活性范围为p H2-5。plantaricin LP21-2可被胃蛋白酶,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解,抑菌活性完全消失。(3)细菌素的抑菌机制及菌株全基因序列分析选用食品中常见的污染菌作指示菌,探究LP21-2的抑菌谱,通过扫描电镜和透射电镜初步分析LP 21-2的抑菌机理。测定菌株SHY21-2的全基因序列,依据COG数据库的注释结果,分析细菌素合成相关的基因。使用BLASTP程序反推细菌素的基础结构的编码基因。结果发现LP21-2是广谱抗菌肽,能够抑制食品中的李斯特菌、蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌,大肠杆菌和酿酒酵母等食品腐败菌和食源性致病菌。LP21-2是一种Ⅱd类细菌素,对金黄色葡萄菌的作用方式是杀菌而非抑菌;作用机理是导致细胞膜形成孔洞,细胞质泄露,最终细胞死亡。菌株SHY21-2的全基因大小为3,333,809bp,其中包含1个染色体,4个质粒,总共得到3187个完整的编码区(CDS)。注释结果中发现了与群体感应相关的蛋白分子Lux S、Arg C和Lyt T。LP21-2基础结构的编码基因位于染色体上。综上所述,该细菌素具有耐高温,能被人体内消化道中的酶降解,不会对人体产生影响的特点。另外,该细菌素不仅能抑制抗革兰氏阳性菌,还能抑制革兰氏阴性菌,甚至对酿酒酵母也有一定抑制作用。因此,细菌素plantaricin LP21-2能作为无毒、高效、广谱的防腐剂应用到食品工业中。
其他文献
水资源作为生态与环境中重要的组成要素,受全球变化影响较大。目前,气候变化和人类活动对水资源的直接和间接影响,是全球变化研究的重要内容之一。水循环系统是气候系统的重要组成部分,气候变化必然引起水资源的时空变化,而人类通过改变流域下垫面、工农业取用水等活动,不同程度上改变了流域内天然的产汇流机制,还直接影响到流域水资源的时空分布。气候变化和人类活动作为水资源变化的主要驱动因子,研究二者对地表水资源的相
将菊粉添加到面制品中以提高人们日常饮食中膳食纤维摄入量,是近年来研究的热点,但在实际加工中添加菊粉还影响了面团和面制品的最终品质。目前的研究关于菊粉自身(如分子质量、添加量)、加工条件(如温度、水分、酸碱、盐离子等)以及面筋蛋白组分(麦醇溶蛋白、麦谷蛋白)对面筋蛋白性质影响及其影响机制方面的相关研究报道较少。因此,本文以面筋蛋白为原料,探究了3种分子质量的菊粉(419、1020和3359 Da)对
互文性理论概括并揭示了一种形态复杂、广泛存在的文学现象,它在展现文本之间的指涉与对话的过程中,不但揭示了构成文学和文化的基础,而且使文际关系中的作品在发掘和解读的过程中具有了深远的意义。互文性及后现代性在最近几年已经成为文学批评领域的焦点话题,不少专家都争相为其进行界定、区分,更涌现出众多灵活运用互文性写作方法的后现代作家。英国作家威廉·戈尔丁是二十世纪英国文坛上的一颗耀眼的明星,他凭借代表作《蝇
近年来日本的足球不断进步,在一系列的国际体育赛事上也取得了辉煌的成绩。这得力于目前日本足球青训模式的成功,日本校园足球的迅速崛起和发展都离不开目前日本足协对于足球青训人才培养的高度重视。本文从日本足球青训模式科学发展的各个角度和重点出发,通过文献资料法、专家访谈法、归纳演绎等研究方法,对于日本足球青训模式发展的规划、日本青训学校足球人才培养的理念、日本足球青训后备教练员人才培养的现状、日本足球青训
在资本市场的发展过程中,股价极端上涨和下跌的现象时有发生,对经济发展造成了极大影响,特别是股价极端下跌形成的股价崩盘,将会损害投资者的经济利益,扰乱资本市场的正常秩序,甚至发生实体经济下滑,造成社会动荡。股价崩盘风险是公司股价发生极端下跌的概率,是源于管理层因追求个人薪酬、声誉和升职等利益,在进行公司经营管理时实施的机会主义行为,刻意隐藏公司的负面消息。由于信息不对称和信息传递的阻塞,公司管理层有
青稞是一种营养全面、食用方便的纯天然绿色食品,它具有高蛋白质、高纤维、高维生素、低脂肪、低糖等特点,是我国青藏高原地区的主要粮食作物。青稞β-葡聚糖是青稞的主要活性成分。本研究在体外筛选出一株能高效代谢青稞β-葡聚糖(β-G)的乳酸菌株并探究了β-G的体外酵解特征。此外,利用动物模型实验,评价了目标菌株协同β-G对消化道损伤和肥胖的缓解作用并探究了其缓解的作用机制。本研究的主要结果如下:(1)通过
信息时代,阅读越来越成为人们日常生活中勾连外界、获取新知、习得技能等活动必不可少的途径,当前语文学界无论从教材修订编写,还是学生学业水平测试的试题命制,各专家学者们对阅读的青睐日益高涨。尤其自2009年我国上海中学生正式参加国际PISA测试,他们的非连续性文本与混合文本的成绩跟连续性文本的成绩相比差距很大,使得很多语文教育研究者和中学教师加大了对非连续性文本的关注与反思。加之我国《义务教育课程标准
在2017版《普通高中语文课程标准》中“语文核心素养”的概念正式进入人们的视野并迅速成为语文学习与教学的重心,“语文核心素养”具体包括“语言建构与运用”、“思维发展与提升”、“审美鉴赏与创作”、“文化传承与理解”四个方面,明显突出了语文教学中学生的主体性作用和文化传承的教育精神。作文教学改革成为语文教学过程中培养核心素养的关键性一步。近年来,在高考命题的形式上也有了明显的变化,更加注意发挥学生的创
自闭症谱系障碍儿童的家长期望是指家长基于自己的学识经验和现实情况,对自闭症谱系障碍儿童在成年后应该达到何种状态的希望和期待。目前围绕期望开展的研究主要聚焦教育程度,研究对象多为学校教师和普通家长,特殊儿童家长的期望尚未引起研究者的积极关注,尤其是我国家长对自闭症谱系障碍儿童的期望水平、基本内容等尚不清楚。从另一角度分析,家长期望实际上反映出他们对孩子未来发展状态的初步判断,而对未来的预期会影响个体
近年来,辱虐管理已成为组织行为学领域的研究热点,并引起越来越多的学者们的关注。以往大量的研究表明,辱虐管理一般会对员工的行为和态度产生消极的影响,但也有研究者认为适当的辱虐管理会带来积极的影响。鉴于辱虐管理现象普遍存在,而且目前关于辱虐管理与员工工作绩效之间的研究成果并不完全一致,有学者呼吁我们应从不同的理论角度进行探究和检验辱虐管理对员工工作绩效的内在影响机制及边界条件。本研究在分析前人研究成果