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碱性成纤维细胞生长因子bFGF (FGF-2) (basic fibroblast growth factor)是FGF家族的成员之一,具有促血管形成、诱导胚胎发育、促进神经生长等功能,bFGF在体内分布广泛,尤其是在神经组织中含量丰富。目前已经有大量的研究证实碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤(spinal cord injury SCI)的再生和修复具有重要作用,但由于急性脊髓损伤后bFGFR表达时程早于bFGF转录合成增加,因此限制了机体内源性bFGF发挥保护缺血损伤神经元的作用,这提示治疗脊髓损伤时需在bFGFR高表达时程提供足够bFGF。而通过局部或全身给予外源性bFGF均难以达到理想的治疗效果,本研究正是为解决这一问题而作的基础研究。将bFGF基因以质粒pcDNA3.1为载体,通过脂质体转染法导入雪旺细胞(schwann cell,SC),使外源bFGF基因能持续稳定高表达,在体内合成分泌bFGF,这将可能为损伤脊髓及时提供足量bFGF、为改善脊髓损伤局部微环境奠定基础。本文的研究内容主要包括以下三个部分:1、用混合酶消化法获取高纯度的雪旺细胞;2、PCR扩增bFGF基因片段,构建重组质粒bFGF- pcDNA3.1;3、将pcDNA3.1-bFGF质粒通过脂质体转染法导入雪旺细胞,用ELISA方法检测实验组、空载体组及空白对照组雪旺细胞培养上清中bFGF的表达水平;应用RT -PCR方法检测外源基因bFGFmRNA的表达情况。本研究所取得的结果及结论:1、通过大鼠坐骨神经预变性、混合酶消化法及G-418筛选,可以培养获取高纯度的雪旺细胞。2、选择安全性较高的高拷贝真核表达载体pcDNA3.1,可以将外源性bFGF基因片段与pcDNA3.1进行重组,获取含目的基因片段的真核表达体系。3、将重组bFGF- pcDNA3.1质粒通过脂质体转染法导入雪旺细胞后外源性bFGF基因能即时、持续、稳定表达,极大提高bFGF的表达水平。结论:(1)将bFGF基因以pcDNA3.1为载体通过脂质体转染导入雪旺细胞,能使雪旺细胞在体外培养过程中表达分泌bFGF;(2)经过bFGF基因修饰的雪旺细胞能持续稳定高水平的表达分泌bFGF;但在体外培养过程中因细胞生长条件限制而可能出现细胞bFGF分泌水平降低现象;(3)将bFGF基因与雪旺细胞移植载体相结合,具有独特的优势,不但能为损伤脊髓及时提供稳定高水平的bFGF,还可为神经轴突再生提供支持和引导,这将为损伤脊髓神经元的修复、再生提供极为有利的条件,为临床脊髓损伤的治疗开辟新的前景。