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前言 乳腺癌是危害女性健康的主要恶性肿瘤之一，占妇女癌症死亡率的首位，阐明其发生机理对诊断和治疗具有重要意义。越来越多的资料显示肿瘤是一类细胞周期性疾病，目前对细胞周期的研究表明，细胞周期是由细胞周期素（cyclin）、细胞周期素依赖蛋白激酶（CDK）和细胞周期素依赖蛋白激酶抑制蛋白（CKI）来进行调控的。不同时相（G1、S、G2、M）间存在关键的调控点。G1→S期之间的调控点是细胞内外信号经传递、整合汇集到细胞核，对细胞的增殖进行调控的关键点，该点调控异常与肿瘤发生、发展关系密切。在相关的因子中，Rb、cyclinD1、CDK4／6和p16组成的调控途径研究比较明确，认为与G1→S调控点关系最密切。正常细胞对G1→S的调控同时需要cyclinD1的正调控和p16的负调控。我们应用免疫组化方法，检测p16、clyclinD1的表达情况，旨在探讨乳腺导管非典型增生癌变过程中p16和cyclinD1的变化及其相互关系，为临床早期评估乳腺导管非典型增生恶变倾向，提供客观的有价值的指标。 方法 应用免疫组织化学方法检测p16、cyclinD1蛋白。所有组织标本为沈阳军区总医院病理科1990—2001年外科手术切除标本。随机收集50例乳腺增生组织（其中乳腺导管单纯性增生6例，乳腺导管轻度非典型增生11例，中度非典型增生12例，重度非典型增生21例）及20例乳腺癌（乳腺导管内癌8例，乳腺浸润性导管癌12例人染色方法采用链霉菌抗生物素一过氧化物酶法u—P法厂第一抗体为鼠抗人…上yclinD；单克隆抗体，染色过程采用即用型免疫组织化学超敏S—P试剂盒，均购自福州迈新生物技术开发公司。主要染色步骤为门）脱蜡和水化；门)高温高压抗原修复；p)过氧化物酶阻断溶液室温下孵育10分钟；N川免疫性动物血清室温下孵育30分钟；门)第一抗体4t下孵育过夜；N)生物素标记第H抗体室温下孵育30分钟；（）链亲和素一过氧化物酶溶液室温下孵育30分钟；侣)DAB溶液显色；乃)苏木素复染，中性树胶封固。PBS代替第一抗体作阴性对照。迈新公司即售的阳性对照片作阳性对照。结果判定：CyClinDl以细胞核出现明显棕黄色颗粒为蛋白表达阳性，…6以细胞核和细胞浆出现明显棕黄色颗粒为蛋白表达阳性。P16JyclinD；以阳性细胞数＞ 10％为阳性标本。分级：（－）阳性细胞＜10％；（＋）阳性细胞 10％一30％；（＋＋）阳性细胞 30啪 edo阮；（＋＋＋）阳性细胞＞60助。统计学分析选用X‘检验和相关分析。 结 果 ＼cyclinD；和pl6在乳腺增生组织及乳腺癌组织中的表达 pl蛋白表达定位于细胞核和细胞浆内，cyclinD；蛋白表达定位于细胞核内，均呈棕黄色颗粒小历在乳腺导管单纯性增生组织中表达最强u3．3％X在乳腺导管非典型增生组织中表达下降(轻度sl．8％、中度75．0％、重度66．7％入在乳腺癌组织中表达为55．0％。经统计学分析，乳腺导管单纯性增生J典型增生组织中的 p16蛋白表达率明显高于乳腺癌组织，差异有显著性(P＜0．05人叮linD；蛋白在乳腺导管单纯性增生及轻度非典型增生中阴性表达，在乳腺导管中度非典型增生中表达为 83．3％，重度非典型增生中表达为76．2％，在乳腺癌组织中表达为乃．0％，随着 ·2·病变轻度非典型增生一中、重度非典型增生一癌的演进，其阳性表达率逐渐升高，以中＼重度非典型增生最为明显。中、重度非典型增生组厚腺癌组与乳腺导管单纯性增生组及轻度非典型增生组比较差异均有显著性瞩＜0．05厂而中、重度非典型增生与乳腺癌组比较差异无显著性瞩＞0．05人 2o16止yclinD；蛋白在乳腺各组病变中表达的相关性 经统计学分析，P16／yClinD；蛋白表达呈负相关关系（P＜0．05），相关系数为－0．567。 讨 论 1、P16、cyclinD；异常与肿瘤的关系 近年来的研究认为癌症可能是一类细胞周期性疾病。细胞增殖周期各调控点的转换受控于细胞周期蛋白（CyC）一细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKS）一细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(KI叫，这一组分子的相互作用，即 cyclins和 CKIs对 CDKs的正负调节作用，具体为cyclinD；和P16对CDK优的正负调节作用。cyclinD；在许多肿瘤中发现有扩增，尤其在乳腺癌中，扩增可达15．0％，而过表达可达 45．0％。尽管过度表达的 cyclinD；使细胞易被转化，但是它自己不足以使原代细胞发生转化，须与其他原癌基因协同作用，cyclinD；是目前公认的潜在癌基因，而Pm则可与cyclinD；竞争结合CDK。，抑制其活性，从而抑制细胞增殖，呈现抑癌基因作用。细胞周期调控中，P16失活和／或cyclinD；的过表达，可能引起细胞异常增殖和分化失控，最终导致肿瘤发生。 2I ／yclinD；蛋白表达与乳腺癌发生发展 本研究结果显示，乳腺导管单纯性增生3典型增生组织中pl6蛋白表达率明显高于乳腺癌组织，且差异有显著性(P＜0．05人这一结果与文献报道基本一致，是乳腺癌发生发展过程中