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黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)为茄科(Solanaceae)枸杞属(Lycium)植物,多年生灌木,藏名“旁玛”。其果实具有很好的营养价值和药用价值,同时因其花色苷含量高,也被称为“花色苷之王”。本论文对黑果枸杞超微粉制备工艺进行优化,同时对其花色苷成分进行定性分析,并对花色苷改善HepG2细胞脂质积累作用及其机制进行研究。论文主要分为以下三个部分:
(1)采用正交实验对低温制备黑果枸杞超微粉工艺进行了优化,确定黑果枸杞超微粉最佳工艺。结果表明最佳工艺参数为物料加水量0.5%,气源压力0.70MPa,分选转速55Hz,液氮冷冻时间2h。在此条件下超微粉粒径可以达到19.82±0.53μm。对获得的黑果枸杞超微粉水提物进行研究,发现水溶液中总多糖、花色苷含量、抗氧化活性明显高于普通果粉,表明超微粉能有效增加黑果枸杞中有效成分的溶出率。
(2)通过UPLC-MS分析黑果枸杞花色苷富集物中主要成分,结果表明黑果枸杞花色苷富集物的母核以矮牵牛素和锦葵色素为主。
(3)利用0.5mM油酸处理人肝癌细胞(HepG2)48h建立非酒精性脂肪肝病细胞模型,对黑果枸杞花色苷富集物及两种花色苷单体改善HepG2细胞脂质积累作用进行研究。油红O染色结果表明黑果枸杞花色苷和两种单体化合物具有明显降低脂质积累的效果,ROS清除实验表明花色苷及两种单体化合物均具有较好的清除细胞内活性氧的能力。利用相关生化指标对矮牵牛素和锦葵色素改善细胞脂质积累作用进行评价,结果表明矮牵牛素和锦葵色素能明显降低相关指标的水平。采用Western Blot和qPCR实验对其作用机制进行验证,结果表明经过花色苷单体化合物处理后,细胞通过上调自噬蛋白水平降低脂肪酸合成,减少细胞脂质累积,从而达到改善非酒精性脂肪肝目的。
(1)采用正交实验对低温制备黑果枸杞超微粉工艺进行了优化,确定黑果枸杞超微粉最佳工艺。结果表明最佳工艺参数为物料加水量0.5%,气源压力0.70MPa,分选转速55Hz,液氮冷冻时间2h。在此条件下超微粉粒径可以达到19.82±0.53μm。对获得的黑果枸杞超微粉水提物进行研究,发现水溶液中总多糖、花色苷含量、抗氧化活性明显高于普通果粉,表明超微粉能有效增加黑果枸杞中有效成分的溶出率。
(2)通过UPLC-MS分析黑果枸杞花色苷富集物中主要成分,结果表明黑果枸杞花色苷富集物的母核以矮牵牛素和锦葵色素为主。
(3)利用0.5mM油酸处理人肝癌细胞(HepG2)48h建立非酒精性脂肪肝病细胞模型,对黑果枸杞花色苷富集物及两种花色苷单体改善HepG2细胞脂质积累作用进行研究。油红O染色结果表明黑果枸杞花色苷和两种单体化合物具有明显降低脂质积累的效果,ROS清除实验表明花色苷及两种单体化合物均具有较好的清除细胞内活性氧的能力。利用相关生化指标对矮牵牛素和锦葵色素改善细胞脂质积累作用进行评价,结果表明矮牵牛素和锦葵色素能明显降低相关指标的水平。采用Western Blot和qPCR实验对其作用机制进行验证,结果表明经过花色苷单体化合物处理后,细胞通过上调自噬蛋白水平降低脂肪酸合成,减少细胞脂质累积,从而达到改善非酒精性脂肪肝目的。