金鱼草为车前科金鱼草属植物种,原属玄参科,因花形似金鱼而得名,属于多年生草本植物。金鱼草除了广泛的园林应用外,在科研上也是经典的模式作物,它在生长阶段叶序会发生变化,因此十分适合研究叶序变化的调控机理。综合考虑生长素极性运输对叶序发育的重要作用和金鱼草同一时期不同叶序基因表达量的差异,选择克隆生长素输出载体PIN1c基因,研究Am PIN1c基因功能。获得下列主要结果:1、分析实验室金鱼草幼芽顶端分生组织转录组文库,选择在不同叶序生长点表达量差异较大的PIN1基因,在NCBI网站同源搜索到金鱼草同源PIN1c基因,并设计引物。提取金鱼草RNA,结合RT-PCR方法克隆得到了Am PIN1c基因。2、Am PIN1c大小是1689bp,和多个物种PIN基因同源性较高,Am PIN1c基因编码蛋白质分子式为C₂₇₄₉H₄₃₀₆N₇₁₂O₇₇₂S_24,氨基酸数为553,分子量为60452.18,理论p I为9.14,是稳定蛋白,亲水性为0.246,有8个跨膜重叠,4个潜在磷酸化位点。生长素输出载体主要定位在内质网中,达55.6%。3、利用荧光定量PCR技术分析Am PIN1c基因在金鱼草生长周期内各器官的表达量,并进行排序:成熟茎>成熟根>成熟叶>成熟花>幼茎>幼根>幼叶。4、通过双酶切及同源重组的方式构建过表达载体,冻融法转入大肠杆菌和农杆菌,再用浸花法转入拟南芥,获得了转Am PIN1c基因植株,利用卡那霉素、庆大霉素、利福平与潮霉素B等抗生素筛选阳性苗。5、转Am PIN1c基因的拟南芥前期生长较慢,花芽分化和抽薹较晚;叶片增多变大,侧根与分支增多;植株上部发现有对生表型,确认了Am PIN1c基因对植株生长和叶序发育都有一定影响。6、随着培养基中IAA浓度的增加,转Am PIN1c基因拟南芥比WT更加敏感,生长优势更加明显,主根更长、侧根增多,叶面积也增加了。