斑马鱼两个Tob家族基因的研究

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本论文工作从特定时期斑马鱼提取特定组织的total RNA,反转录得到cDNA,标记探针后筛选斑马鱼cDNA文库,进一步通过原位杂交鉴定获得一个组织特异性表达的基因Tob1a。然后通过同源基因搜索,推测斑马鱼中还存在一个与Tob1a有同源性的基因,并通过PCR从cDNA文库中克隆出该基因,命名为Tob1b。Tob1a和Tob1b均编码322个氨基酸组成的蛋白,蛋白间的序列同源性达82%,它们与哺乳动物Tob1蛋白的序列同源性也超过80%,是TOB/BTG家族新成员。研究发现,Tob1a和Tob1b基因都是母源基因,在囊胚期均有大量的转录物。Tob1a在体节形成时期在胚胎的孵化腺、脊索和尾芽有比较强的特异性表达,在24小时的胚胎的尾部有比较弱的表达。Tob1b从体节形成中期开始主要在体节中特异性表达,一直到48小时,之后在胚胎的眼睛和鳍有较强的表达。在哺乳动物细胞中的定位实验表明,Tob1a主要定位在细胞核中,可能通过影响基因转录而发挥作用。在斑马鱼胚胎中过量表达Tob1a的C-端区域,24小时胚胎出现背部化特征,早期胚胎中胚盾标记基因goosecoid的表达略有增强,而腹部标记基因eve1的表达下降,表明Tob1a可能在胚胎的背腹分化中起作用。但其具体的作用和作用机制还有待深入研究。
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