前言 肺癌是常见的恶性肿瘤之一。近年来肺癌的发病率及死亡率在包括我国在内的世界上许多国家和地区呈明显上升趋势，特别是与空气污染，吸烟有关的城市人口中，肺癌居常见肿瘤之首，而非小细胞肺癌(Non-Small Cell lung Cancer,NSCLC)占全部肺肿瘤的80％～85％。 肺癌的发生是一个多基因参与，多阶段发展的复杂过程。各种致癌因素引起细胞内多种基因的变化，其中包括整合素连接激酶(integrin-linked kinase；ILK)。ILK是Hannigan GE等于1996年确定并克隆出来的。它是一种59KD的包含锚蛋白重复序列的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，可以直接同整合素β1的胞内结构域结合，以磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)依赖的方式激活，是—个多结构域的局部粘连蛋白，具有许多直接的生化活性，调节细胞内外的信号传导，对细胞的存活，增生，分化及迁移进行调控。因此ILK的活性或表达水平的微小变化都可引发信号通路及其随后的细胞周期的变化，导致人类肿瘤以及和细胞生殖相互关联的疾病的产生。 目前，国内外尚未有关于ILK在肺癌中表达情况的研究，ILK在其他肿瘤组织的研究结果也不甚—致。本实验通过特异的ILK抗体检测101例非小细胞肺癌中ILK蛋白的表达情况，了解其与临床病理特征的关系及与非小细胞肺癌预后的关系并探讨其意义。 材料与方法 1．组织标本 共101例标本，其中随机收集1999年11月～2000年2月辽宁省肿瘤医院手术切除的原发性非小细胞肺癌58例，10例为2002年中国医科大学附属一院手术切除的非小细胞肺癌组织，33例为沈阳军区202医院2003年手术切除的非小细胞肺癌组织。全部标本均含正常组织，且无术前放，化疗史。 2．方法 2二1采用链菌素抗生物素蛋白一过氧化物酶免疫组化法(S一P法)，检测101例非小细胞肺癌组织，相应正常肺组织的石蜡标本中几K蛋白的表达。结果判定:每张切片在光镜下随机选取5个高倍视野。观察阳性细胞染色强度;无染色为0分，淡黄色为1分，黄色为’2分，棕黄色为3分。0分为阴性，1分为弱阳性，2分为阳性，3分为强阳性。 2.2免疫印迹法:取在深冻冰箱中冻存的肺癌及正常的肺组织0.125cm，大小各一块复融后分别加人预冷并含蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液500过，匀浆，超声振荡破碎细胞，混悬冰上静置30.运后离心(10夕呱扩而n，30n五n)取上清，用酚试剂法侧蛋白质浓度。用含SDS的样品缓冲液调整各样品总蛋白浓度为3m扩d，100℃加热smin后上样，每泳道加样品20ug。采用10%SDS一PAGE凝胶电泳，50v电压下一个半小时，根据川曰改.er位置，切取相应的凝胶，电转膜后将PVDF膜与一抗杂交，4℃解育过夜(1%BSA将ILK一抗稀释成Zug/d)。二抗为碱性磷酸酶标记的兔抗鼠免疫血清(1%BSAI:1000稀释)，室温孵育二小时，BCIP/N盯显色3一sn垃n。结果判定:在marker的60Kda附近出现的特异性条带，用计算机图像分析系统测定灰度值，来判断ILK蛋白相对含量。 3.统计学处理: 采用SPSS for windows 10.0软件，，用K叩碗一Meier法进行生存数据的分析，肠g一rank检验差异性，用Cox模型进行多因素分析。对R工表达与临床病理特征的关系采用xZ检验。将蛋白印迹结果的灰度值分为肺癌组和正常组进行配对t检验。P<0.05有显著意义。实验结果 1.免疫组织化学结果 1 .1 ILK阳性染色定位及不同部位表达情况 ILK在平滑肌细胞和纤维母细胞胞浆中呈阳性或强阳性表达，但我们在结果判定时并未把间质的表达(无论正常组织或癌组织)计算在内。在正常的支气管粘膜上皮，n型肺泡上皮细胞胞浆中为弱阳性表达，在肺癌细胞胞浆中多呈阳性或强阳性表达，在I型肺泡上皮细胞和淋巴细胞中不表达。 1 .2非小细胞肺癌(Nsc扰)中ILK蛋白的表达与临床病理特征的关系 统计学分析显示:几K在鳞癌中的强阳性表达率为52%，在腺癌中的强阳性表达率为58%，二者差异无显著性，(P二0 .433>0.05)·，在鳞癌中，中低分化的癌细胞n火的强阳性表达率为70%，明显高于高分化的鳞癌细胞(5%)，二者差异有统计学意义(P二0 .001<0.05)，而对于腺癌不同分化程度之间差别无统计学意义(P二0.161>0.05)，n工蛋白的强阳性表达率与临床分期及有无琳巴结转移均无统计学意义(P二0.983，P二。.845>0.05)。 1 .3非小细胞肺癌(NSCLC)中且蕊蛋白表达与生存时间的关系 对53例随访时间超过36个月的病例，采用K喇an一Me众汀进行单因素分析，结果R工强阳性表达(3+)与阳性、弱阳性或阴性表达(2+，l+，0)的三年生存率分别为21%和20%J魂-皿堪检验差异无显著意义，P二0.侧刃8，C冶x多因素分析表明:术后生存期与NSCLC的临床分期(P二0.001)及琳巴结转移(P二0.加2)显著相关。几蕊蛋白的表达不是影响NSCLC预后的独立危险因素(P=0.%2)。 2.蛋白印迹结果 侧定各样品几K蛋白含量灰度值，肺癌组织的几K蛋白含量明显高于正常组织，差异有显著性意义(P二0刀43<0 .05)讨论 整合素连接激酶(几K)是一种丝/苏氨酸蛋白激酶，是一个多结构域的局部粘连蛋白，具有许多