副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis HPS)是猪上呼吸道的一种常在菌,当机体免疫力下降时,会侵入体内并导致以纤维素性浆膜炎、心包炎、关节炎和脑膜炎为特征的全身性疾病,又被称作革拉瑟氏病。该病主要影响4-7周龄的保育猪,给养猪业造成了严重的损失。本研究对2017年9月至2018年7月自河北地区收集的疑似副猪嗜血杆菌感染的107份病料进行细菌分离,对分离菌进行革兰氏染色、卫星生长现象试验,初步判定是否疑似HPS。疑似HPS的细菌再进行PCR(聚合酶链式反应)试验,PCR产物回收测序,在分子水平确定分离细菌为HPS以及所属血清型。共分离出HPS 23株,其中1型3株,4型5株,5型4株,7型3株,14型4株,4株不能定型,分离率21.49%。比较了不同条件下HPS保存时间,结果显示菌落直接在TSA划线培养后在4℃冰箱可以保存8-10天,TSB菌液用30%的甘油作保护剂,在-20℃可以保存45-60天,在-80℃可以保存90天以上。为便于对河北地区HPS的流行进行血清学调查,本研究建立了一种HPS的间接ELISA血清学诊断方法。尽管HPS具有多种血清型,但是所有血清型均能合成细胞致死膨胀素(CDT),该毒素包括三个亚基CdtA、CdtB和CdtC。利用DNAstar软件比较发现,CdtC的免疫原性最好。本研究成功利用大肠杆菌表达了副猪嗜血杆菌致死膨胀素的C亚基—CdtC蛋白,使用专用试剂盒对蛋白进行纯化,纯化后的蛋白经变性处理,经Western blot试验鉴定抗原性良好。将纯化的蛋白作为包被抗原,建立了ELISA方法并优化了最佳反应条件。最佳工作条件如下:重组CdtC蛋白以1μg/mL浓度包被,每孔100μL,37℃包被孵育2小时;用5%的脱脂奶粉做封闭液,每孔200μL,37℃封闭1小时;血清稀释比例1:200,37℃孵育1小时;酶标二抗1:10 000比例稀释,37℃孵育1小时;显色时间为10分钟。用建立的方法检测了30份阴性血清,计算出阳性临界值为0.420,大于该值为阳性;阴性临界值为0.341,小于该值为阴性;介于两值之间的样品需重测。使用猪常见病的阳性血清检测建立方法的特异性,结果显示建立的方法具有较好特异性。批内、批间重复性试验鉴定所建立方法的重复性良好,批内、批间变异系数均在10%以内。使用该方法,检测了2017年9月至2018年7月收集的561份血清样品,阳性率为39.9%。本研究对河北省分离的副猪嗜血杆菌进行了血清型鉴定,并建了对HPS的抗体检测的间接ELISA方法,为河北省副猪嗜血杆菌的调查与防治奠定基础。