番鸭呼肠孤病毒σC基因真核表达及其间接ELISA方法的建立

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:longyonghong520
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:通过探讨番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)的分子生物学特性和免疫学特性,为建立番鸭呼肠孤病毒病的快速诊断方法提供科学的技术资料。方法:根据番鸭呼肠孤病毒MW9710分离株序列设计了两套PCR引物,利用番鸭胚成纤维细胞增殖番鸭呼肠孤病毒,提取病毒基因组RNA,用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)对MW9710株病毒σC基因片段进行扩增,连接pMD18-T载体测序验证后,将产物克隆插入到酵母表达载体pPIC9K中,转化大肠杆菌DH5a中,挑取阳性克隆,获得酵母表达重组质粒pPIC9K-σC。用SacI酶切线性化表达重组质粒pPIC9K-σC,电转化至巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞内,经PCR鉴定和G418抗性筛选,获得了5株pPIC9K-σC酵母阳性整合子,挑取1株进行甲醇诱导表达,SDS-PAGE检测发现pPIC9K-σC酵母整合子经诱导表达后在酵母培养基上清中有明显可见的目的蛋白条带,分子量大小与预期相符合,而未重组的酵母空载体中在经甲醇诱导表达后的上清中没有相应的蛋白条带,经检测验证表达量可达40mg/L。结果:(1)成功构建番鸭呼肠孤病毒MW9710株σC基因巴斯德毕赤酵母表达体系。(2)证明了目的σC蛋白在巴斯德毕赤酵母中能够有效地表达并大量分泌。(3)以番鸭呼肠孤病毒阳性血清为一抗和AP酶标记的羊抗鸭IgG为二抗,通过Western Blot检测表达产物σC蛋白的活性,表明了表达产物σC蛋白具有免疫活性。(4)通过间接ELISA初步建立了特异性较高的σC蛋白检测鸭血清中呼肠孤病毒的方法。结论:本研究构建了番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的表达载体,并且于毕赤酵母中实现了高效表达,为番鸭呼肠孤病毒病的快速诊断试剂盒奠定了技术基础。
其他文献
班级管理是一门艺术,班主任作为班级的“灵魂”,要深入每个学生的心灵,成为孩子成长的引航人.做好班级管理工作,要树立正确的教育理念,言传身教引导学生,用爱呵护美好心灵,充
摘要: 鉴于大学英语与中学英语有很大不同,本文探讨了英语教师如何引导大一新生尽快适应大学英语学习,实现从中学英语向大学英语的平稳过渡。  关键词: 大一新生 大学英语学习 教学模式    新学年伊始,又有许多高中毕业生即将进入梦寐以求的大学校园,开始新的学习和生活。学生进入高校学习是人生的一个转折点,英语是各高校的必修课之一,大学英语的教学模式与中学有很大不同。学生需要用相当长时间去适应大学英语的
摘要: 中国英语是汉语与英语语言文化交流过程中所产生的一种语言现象。它是用不属于讲英语民族的人所惯用的词语表达中国社会文化诸领域特有事物,具有中国特点的英语;它以规范英语为基础,能够进入英语交际,不受母语干扰;并有益于传播中华文化,将随着中国人使用英语的普及和中国特色的形成而逐渐扩充,从而丰富和发展英语与世界文化。  关键词: 中国英语 发展 影响    根据全球语言监督机构的最新报告,英语正在经
疫情防控期间,网络课堂成了我们教师和学生的常态.信息技术与学科教学深度融合的未来已来.今天让我们一起走进一起中学APP,从信息技术与英语学科教学深度融合的角度,谈谈我们
本文借助氨基酸自动分析仪对杜仲离体培养愈伤组织、树叶、树皮中氨基酸含量进行了系统研究,共检测出16种氨基酸,其总含量为41.49~208.22mg/g,其中包括7种必需氨基酸。 In this paper, amino acid
本文以英语课堂教学案例为研究点,重点探讨了竞争机制的几种常见表现形式,如一对一竞争、组内竞争、小组竞争、男女竞争.在教学实践中,笔者发现引进竞争机制能有效地提高同学
学困生教育是一线教师经常面对的难题,大部分学困生往往会存在一些心理上的问题,本文着力就如何运用积极心理学知识做好学困生教育转化进行探讨分析.
随着信息技术的不断发展,微课出现在了我们的眼前,其是一种新的教学方法.因此,在实践教学活动中,多数教师发现将微课应用到教学中,既可以激发学生们学习的积极性,还可以调动
摘要: 本文对166名非英语专业大学生(61名英语学优生,105名英语学困生)进行了元认知策略问卷调查。根据结果分析并在综合Oxford(1990)和Cohen(1997)的策略培训模式之后建立了针对语言学习低效者的元认知策略培训模式,并实施了为时一学期的培训,而后用课堂观察、访谈等方式对105名学困生(47人为实验组,58人为对照组)进行了二次调查,并结合他们的英语四级考试成绩进行对比分析。结果
作文是语文教学的重要内容,它能够全面地反映出学生的语文综合素养.在素质教育和新课改的要求下,传统的初中语文作文教学已经越来越不适应现代化教育的要求,学生在作文写作中