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目的肺纤维化(PF)是由多种病因引起的具有相似病理过程的一类弥漫性肺疾病,其病理特征表现为早期肺泡结构破坏和弥漫性肺泡炎,继而出现细胞外基质(ECM)过度沉积,并逐渐发展为弥漫性肺间质纤维化,造成肺功能障碍,病人多死于进行性加重的肺纤维化所致的呼吸衰竭。迄今为止,肺纤维化的发病机制尚未阐明,发病率逐年增加,并缺乏有效的治疗措施,故寻找行之有效的治疗肺纤维化的药物是目前医学领域需要解决的问题之一。莪术油是蓬莪术、广西莪术和温郁金根茎的挥发成分,研究表明:莪术油能抑制人卵巢上皮癌细胞SKOV3、人鼻咽癌细胞CNE-2、小鼠肝癌细胞HepA和小鼠肺癌细胞Lewis的增殖。也有报道表明:莪术油及莪术油微球对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖有显著抑制作用、并且呈浓度依赖;莪术油及莪术油微球能诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡,并且能阻滞细胞周期。不过,关于莪术油对人肺腺癌细胞A549的作用尚少见报道。A549细胞是肺上皮肿瘤细胞系,具有肺泡Ⅱ型上皮细胞的特征。肺泡上皮细胞在肺结构和功能的维持过程中起重要作用,研究表明:A549细胞表达的组织蛋白酶,参与细胞外基质的降解和细胞凋亡过程。本实验体外培养A549细胞,研究莪术油对A549细胞增殖的抑制作用,并且检测莪术油对A549细胞周期、细胞凋亡以及组织蛋白酶水平的影响,从而探讨莪术油对上皮细胞的作用。方法1 MTT比色法测定不同浓度的莪术油对A549细胞作用24 h、48 h、72 h后的抑制率。2 PI单染法和流式细胞术分析不同浓度的莪术油对A549细胞作用24 h后细胞周期及凋亡峰的变化。3 AnnexinⅤ-FITC/PI双染法和流式细胞术检测不同浓度的莪术油对A549细胞作用24 h后正常细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞各占比例。4蛋白质免疫印迹法Western blotting测定不同浓度的莪术油对A549细胞组织蛋白酶水平的影响。结果1与莪术油共育24 h后的A549细胞形态发生变化,细胞质中的致密颗粒增多;随着莪术油浓度的提高,细胞的数量逐渐减少。2 MTT比色法测得随着莪术油浓度提高和作用时间延长,莪术油对A549细胞的抑制作用增强。48 h与72h相比,抑制率没有明显变化,但都大于24h抑制率。3流式细胞术测定PI染莪术油作用24h后的A549细胞,结果显示:细胞周期停滞在G0/G1期,阻止其进入S期,G2/M期无明显变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法及流式细胞术测得不同浓度的莪术油导致A549细胞早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞比例改变且呈正相关,但不同剂量组间差异无统计学意义。4蛋白质免疫印迹法Western blotting结果显示:正常培养的A549细胞表达组织蛋白酶D、K;不同浓度的莪术油对A549细胞作用24 h后,可以使其组织蛋白酶D、K的水平提高。结论莪术油对A549细胞的增殖具有抑制作用,并且呈时间依赖和浓度依赖,其作用是通过阻滞细胞周期来实现的;莪术油可上调A549细胞组织蛋白酶的水平。本实验提示:①莪术油可能通过影响上皮细胞的DNA合成影响细胞增殖;②莪术油可能通过上调组织蛋白酶水平降解细胞外基质,维持肺基质的平衡。