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本文首次将荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)用于青岛文昌鱼染色体基因定位研究,确立了青岛文昌鱼染色体荧光原位杂交的技术体系,并且对18S rDNA和核糖体蛋白L19和S19基因进行了染色体基因定位及荧光显带基因定位的研究。
青岛文昌鱼杂交体系为:鲑鱼精DNA超声波打断处理20min;采用5 ng/μL的蛋白酶K处理3~5 min和10 ng/μL RNA酶处理1h进行预处理;封闭DNA采用100~300倍探针浓度的鲑鱼精DNA;50%甲酰胺/2×SSC,1×SSC,2×SSC,42℃的洗脱严紧度;3%BSA进行抗体封闭;杂交温度保持37℃;杂交时间可以控制在12~18 h之内;PI复染量20μl/片。
青岛文昌鱼18S rDNA染色体FISH基因定位信号数为2~6个,主要分布于4条染色体上:1号染色体近着丝粒区,2号染色体长臂近末端区,8号染色体长臂中部,12号染色体着丝粒区。同一染色体杂交信号检出频率不同,荧光信号强弱也不同。2号、8号、12号杂交信号较强,1号杂交信号较弱。12号染色体信号检出频率最高,8号次之,1号和2号检出频率较低。在8号和12号染色体的两条同源染色体上均可以同时检测到信号。1号染色体通常只在一条同源染色体上检测rDNA荧光信号。2号染色体因为可能为性染色体,染色体差异较大,因此定位结果也不一致。
青岛文昌鱼染色体荧光显带结果显示DAPI带与文昌鱼C带近似,表明文昌鱼染色体异染色质区含AT碱基高;PI-R带显带与常规R显带带型基本一致,表明文昌鱼R显带与GC含量相关。18SrDNA荧光显带FISH定位结果显示,杂交信号位于DAPI带2q17,8q12,12q11带;PI-R带1q11,2Aq24,2Aq24,8q13,12q11带。
核糖体蛋白RPL19和RPS19定位结果均显示一对信号。RPL19基因初步定位结果显示存在于4号染色体末端。