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整合素β2亚族又称白细胞粘附分子家族，是由三种不同的α亚基（CD11a、CD11b、CD11c）分别和一共同的β2亚基以非共价键结合组成的异二聚体，主要介导白细胞之间、白细胞与内皮细胞之间以及白细胞与细胞外基质成分、补体、病原微生物之间粘附，在生物体发育、炎症反应、创伤愈合、肿瘤发生等生理和病理过程中发挥重要作用。作为白细胞激活的一个重要标志其膜表面粘附分子如Mac-1表达上调、聚合、变构、亲和力增高，继而影响PMN的粘附、游走、吞噬、释放功能。Mac-1（CD11b/CD18）分子的三维结构显示其功能表现主要取决于它的α亚基（CD11b），它不仅是中性粒细胞（PMN）粘附活性的分子基础，而且与PMN的识别功能和杀伤效应有关。 PMN存在三个功能状态，即静息（quiescent）、致敏（primed）、活化（activited）。正常情况下，组织少见PMN，而循环中PMN呈非活化状态；活化的PMN是一把双面刃，既参与机体防御功能和免疫反应，同时又可带来组织的继发性损伤；PMN处于致敏状态时其主要表现为活性氧的释放能力明显增加，Hallett把致敏比如交通路口的“黄、绿灯”，此时细胞信号亮起了“黄灯”，等待更进一步刺激，一触即发，进入活化和过度活化状态。 近年来研究发现，创伤后机体细胞、组织、器宫对继发性缺血、代谢或炎症应激（二次打击）有放大效应，因而提出细胞预激的慨念，一个细胞对初次损害有准备称预激（Priming），创伤致PMN预激尤为常见。大量PMN在血管内同时激活且过度活化，牢固粘附于血管内壁，活化的PMN早期在组织、器官内扣压明显增加，是创伤引发全身炎症反应综合征（SIRS）、多器官功能不全（MODS）甚至衰竭（MOF）的主要途径。已知作为第二信使的胞内游离钙参与创伤后PMN介导的许多生理、病理过程，钙拮抗剂作用于钙通道，阻止钙库释放和外钙内流，防止胞内游离钙浓度升高，抑制PMN产生活性氧和释放氧化酶，并具有抗脂质过氧化作用。为了明确创伤后PMN不同功能状态下其粘附活性与杀伤效应的动态变化及其功能调控途径，本实验采取大鼠多处骨折和广泛 第。旱巨大学＊项士学住俺文 户丈捞多 软组织挫伤建立严重创伤（或多发伤）动物模型并体外以LPS攻击PMN模拟 “二次打击”，采用下述方法：1)利用紫外分光法检测0／自由基：2)使用 Fura卫八M荧光探针技术检测胞浆游离钙浓度＊a》＋h；3)采用流式细胞术分别 检测Mao4表达的阳性细胞百分率、Mao－l表达的蛋白定量；4)根据洗脱液 细胞计数检测PMN丕C粘附活性；5)用光学显微镜观察肝、肺组织学改变。 研究创伤后PMN致敏与活化和过度活化的动态过程中其表面粘附分子Mao．l 的表达与粘附活性的变化规律和钙桔抗剂对其影响，探讨PMN致敏的机制和 生物学标记，为严重创伤的预防和治疗拓展一个新思路。 结果显示： 1．PMN体外释放O。”自由基量反映其在体循环时的功能状态。创伤后不 同时相的动态过程中，2、4h时相点中性粒细胞体外自发释放OZ”自由基量与其 对照组表达值无明显改变，随着创伤后时间的逐渐延长，8、12、24h时相点 ＊MN释放q”自由基量明显增多(P＜o刀5人与此同时，20 时相点＊MN＊Dllb 表达的阳性细胞百分率呈上调改变（P＜0刀5），PMN的胞浆游离钙离子浓度 ［＊／h亦明显上升0叩刀5＼但P MNMN＊Dllb表达的蛋白定量与其对照组值无 明显变化，PMN－EC粘附活性也无显著增强，而 8、12、24h时相点则显示上 述指标均较对照组明显增加，表明此时PMN进入活化状态。组织切片示创伤 后2、4h时相点肝、肺组织毛细血管内可见少量白细胞附壁，肝索排列整齐， 组织无明显水肿及白细胞浸润；创伤后 12h时相点肝、肺组织血管内大量白细 胞粘附于血管壁，并可见血栓形成，肝索紊乱，血管周围组织浊肿变性、可见 明显白细胞浸润。 2．于创伤相对应的时相点分别以LPS攻击PMN后显示其OZ”自由基释放 量、［Cd勺i、CDllb的表达及P删EC粘附百分率均较其对照组值呈不同程度 升高；尤其是2、4h时相点监测结果较同组其它时相点增加更为明显（P＜0刀1）， 且与创伤组比较相差亦非常显著（P＜0刀1），由此显示PMN已过度活化，而此 时相点PMN先前在体即处于致敏状态。 3．钙桔抗剂治疗组则显示各时相点（尤其2、4h）上述指标较攻击组结果 均呈明显下降（P＜0刀1）；组织切片示治疗组2、4h时相点肝、肺组织毛细血管 内无白细胞粘附，组织结构基本正常，12h时相点治疗组肝、肺组织学改变较 创?