【摘 要】
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H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）是一种低致病性禽流感病毒（Low pathogenic avian influenza virus,LPAIV）,在我国家禽中广泛流行,它不仅给养禽业带来巨大损失,同时还威胁着公共卫生安全。研究发现H9N2亚型流感病毒是引发人感染的H7N9和H10N8流感病毒的内部基因供体。此外,H9N2亚型流感病毒还可以直接感染哺乳动物
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H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）是一种低致病性禽流感病毒（Low pathogenic avian influenza virus,LPAIV）,在我国家禽中广泛流行,它不仅给养禽业带来巨大损失,同时还威胁着公共卫生安全。研究发现H9N2亚型流感病毒是引发人感染的H7N9和H10N8流感病毒的内部基因供体。此外,H9N2亚型流感病毒还可以直接感染哺乳动物和人类,近年来我国人感染H9N2病毒的病例不断增加。因此,就当前流行的H9N2禽流感病毒对哺乳动物的致病性展开研究对疾病的监测和防控具有重要意义。本研究2017～2019年从华南地区禽屠宰场和活禽交易市场采集咽拭子和泄殖腔拭子共1420份,通过PCR检测筛选出流感M基因阳性样品进行鸡胚接种,再对回收的尿囊液进行HI试验和基因测序,从中分离到18株H9N2亚型禽流感病毒,分离率为1.3%。通过基因序列分析发现,18株H9N2病毒的HA、NA基因均属于Y280-like分支,PB2、M基因均属于G1-like分支,PB1、PA、NP、NS基因均属于F/98-like分支,根据基因型划分,均属于近年来新发现的G57基因型;18株病毒的基因组存在不同程度的功能位点突变,包括HA蛋白的H183N、A190T和Q226L,PB2蛋白的I292V和588V,PB1蛋白的I368V,PA蛋白的K356R,NP蛋白的G292E,NP蛋白的L479F,M1蛋白的S30D和T215A,M2蛋白的S31N,NS1蛋白的P42S等,提示病毒的α-2,6唾液酸受体结合能力、聚合酶活性、哺乳动物适应性、致病性有所增强,对金刚烷胺类产生了耐药性。通过固相结合ELISA试验发现,参与试验的8株病毒均具有结合α-2,6唾液酸受体的能力,且只有毒株DK4/18还保留结合α-2,3唾液酸受体的能力。通过细胞感染实验发现,参与试验的8株H9N2流感病毒均能在MDCK、A549、HBE、PK-15、ST和3D4/21细胞上有效复制,在A549和ST细胞上,毒株DK4/18与对照株SW19/16猪流感病毒的峰值滴度无显著差异（P＞0.5）,在3D4/21细胞上,毒株CK237/17与对照株SW19/16的峰值滴度无显著差异（P＞0.5）。通过鸡感染实验发现,参与实验的4株病毒均能引起SPF鸡的排毒和血清转阳,毒株DK4/18和CK237/17能在SPF鸡的气管、肺脏、肠道、肝脏、脾脏、肾脏和大脑中复制,毒株CK93/17能在鸡的气管、肺脏、肠道、肝脏和肾脏中复制,毒株CK384/17能在鸡的气管、肺脏、肠道、肾脏和大脑中复制。通过小鼠感染实验发现,参与实验的8株H9N2流感病毒均能引起BALB/c小鼠血清转阳,其中毒株DK4/18、CK237/17和CK728/17可在小鼠肺脏中复制,毒株DK4/18的滴度5.50±0.20 lg EID50/g/m L为最高。通过用毒株CK93/17进行猪感染实验发现,感染组5头猪均能检测到排毒,鼻洗液病毒滴度为0.70～4.20 lg EID50/m L。在3DPI,猪鼻甲骨中可检测到病毒的复制,滴度为1.37 lg EID50/g/m L。在14 DPI,两头猪中有一头出现血清转阳,HI滴度为1:160。综上所述,目前华南地区G57基因型H9N2禽流感病毒在家禽中流行,其优先与人类受体结合,并获得了适应哺乳动物、致病力增强和耐药性增强等多重突变,且能在哺乳动物细胞和哺乳动物体内进行有效复制。这迫切需要加强对H9N2禽流感病毒的监测并进一步深入研究,以充分评估H9N2禽流感病毒对公共卫生的潜在风险。本研究为H9N2亚型禽流感病毒致病性和跨宿主传播机制的研究提供理论依据和数据支持。
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