论文部分内容阅读
贮袋炎是溃疡性结肠炎患者行全结直肠切除、回肠贮袋肛管吻合术(IPAA)后最常见的远期并发症,严重影响患者术后生活质量,甚至可导致贮袋废用而实施永久性回肠造口手术。贮袋炎病因尚未完全阐明,其中免疫调节异常在发病机制中发挥重要作用。雷公藤多苷作为一种免疫抑制剂具有强大的抗炎和免疫抑制作用,在临床上已广泛应用并取得了满意的疗效。通过建立稳定的大鼠回肠贮袋炎模型,研究雷公藤多苷对大鼠回肠贮袋炎的干预作用,探讨其作用机制,探索治疗贮袋炎的新途径、新方法。一、大鼠回肠贮袋炎模型构建目的:建立大鼠回肠贮袋模型,并采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium salt,DSS)诱导贮袋炎模型。方法:利用显微外科技术建立雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠回肠贮袋手术模型。设假手术组(Sham组),并将回肠贮袋模型成功者大鼠分为IPAA-NI组(non-intervention,NI)、IPAA-DSS组。于术后第31天,Sham组和IPAA-NI组予100ml生理盐水喂养大鼠4天,IPAA-DSS组予4%DSS100ml喂养大鼠4天,每日记录各种大鼠一般情况、体重、血便情况、粪便评分,术后第35天大鼠取Sham组末端回肠、IPAA-NI组及IPAA-DSS组贮袋标本并观察大体标本;将贮袋标本石蜡包埋并切片检查,HE染色评估病理变化;将冰冻标本行实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测贮袋组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α和抑炎因子IL-10的m RNA转录水平。结果:大鼠经IPAA手术后体重均出现短期下降,在第(8.83±1.47)天达到最低水平(280.68±16.07)g后体重逐渐增长;术后第31天,IPAA-DSS组予DSS后体重持续下降,体重下降(59.50±7.23)g,IPAA-NI组体重稳定增长,IPAA-DSS组较IPAA-NI组体重显著减轻(P<0.05);Sham组及IPAA-NI组均无血便,IPAA-DSS组均出现血便(6/6),IPAA-DSS组粪便评分低于Sham组及IPAA-NI组,IPAA-NI组粪便评分低于Sham组,差异均有统计学意义(P<0.01);IPAA-DSS组贮袋病理组织学评分高于Sham组及IPAA-NI组,同时IPAA-NI组高于Sham组,差异均有统计学意义(P<0.01)。IPAA-DSS组的IL-1β、IL-6和TNF-α的m RNA转录水平均高于Sham组(P<0.01)和IPAA-NI组,且IPAA-NI组高于Sham组(P<0.01),IL-10的m RNA转录水平均低于Sham组(P<0.01)和IPAA-NI组,且IPAA-NI组低于Sham组(P<0.01)。二、雷公藤多苷对大鼠贮袋炎治疗作用的研究目的:观察雷公藤多苷对DSS诱导大鼠回肠贮袋炎的治疗作用,检测药物的安全性,探讨其作用机制。方法:建立大鼠回肠贮袋炎模型,将模型大鼠随机分为3组(NI组:无干预;TWP组:予3ml雷公藤多苷混悬液(12mg/kg*d)连续灌胃7天;NS组:等体积生理盐水连续灌胃7天)。实验期间通过观察记录各组大鼠体重变化、便血情况、粪便评分;第8天,NI组、NS组及TWP组取贮袋组织,HE染色进行组织病理学评分,实时荧光定量PCR检测组织IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10的m RNA转录水平,免疫组化染色检测组织occludin表达水平;留取血标本,检测雷公藤多苷对肝功能的影响。结果:NI组及NS组大鼠体重逐渐下降,TWP组大鼠体重下降后逐渐增长;NI组于第(6.00±0.89)天肉眼血便消失,NS组于第(5.83±0.75)天肉眼血便消失,TWP组于第(3.33±0.52)天血便消失。TWP组粪便评分均高于NI组及NS组(P<0.01);TWP组贮袋的组织病理学评分均低于NI组及NS组(P<0.01),NI组和NS组组织学评分之间差异无统计学意义(P>0.05);TWP组的IL-1β、IL-6和TNF-α的m RNA转录水平均低于NI组和NS组(P<0.01),NI组和NS组之间差异无统计学意义(P>0.05)。TWP组的IL-10m RNA转录水平均高于NI组和NS组(P<0.01),NI组和NS组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Occludin在TWP组中表达水平高,与NI组、NS组比较差异有统计学意义(P<0.05),NI组和NS组两组之间的比较差异无统计学意义(P>0.05)。血清AST、ALT各组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.利用显微外科技术成功建立大鼠贮袋模型,并稳定的建立DSS诱导的大鼠回肠贮袋炎模型。2.回肠贮袋炎大鼠中IL-1β、IL-6和TNF-α表达升高,IL-10表达下降,提示致炎因子和抑炎因子共同参与贮袋炎的发生发展。3.TWP对DSS诱导大鼠贮袋炎模型有一定的治疗作用。TWP治疗大鼠贮袋炎的机制可能是通过下调促炎细胞因子,上调抑炎因子的基因转录水平,减轻炎症损伤从而改善炎症。同时,TWP可能通过增加occludin的表达,增强肠黏膜上皮保护屏障,从而对大鼠贮袋炎起到治疗作用。4.TWP对实验大鼠ALT、AST未见明显影响,具有较好的安全性,为指导临床安全用药方面提供实验依据。