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目的:探究田蓟苷预处理对缺氧复氧（H/R）诱导的心肌细胞的保护作用,以及是否通过调节p53/NOX4通路调节细胞凋亡和氧化应激损伤,为深入研究田蓟苷的心肌保护作用提供试验基础和理论依据。方法:（1）体外培养大鼠H9c2心肌细胞,构建缺氧/复氧损伤（H/R）模型,将细胞分为3组:正常组（Normal组）,模型组（H/R组）,田蓟苷给药组（Til组）。（1）CCK-8法测定细胞活力,确定田蓟苷给药浓度;（2）活性氧试剂盒测定ROS的生成;（3）实时荧光定量H9c2心肌细胞中p53、NOX4、Nrf2、HO-1 m RNA的表达;（4）免疫蛋白印迹法检测H9c2心肌细胞中p53、NOX4蛋白的表达。（2）体外培养大鼠H9c2心肌细胞,构建缺氧/复氧损伤（H/R）模型,将细胞分为5组:正常组（Normal组）,模型组（H/R组）,田蓟苷给药组（Til组）,p53激动剂组（Nutlin-3a组）,田蓟苷联合p53激动剂给药组（Til+Nutlin-3a组）。（1）CCK-8法确定激动剂的给药浓度,测定各组细胞活力;（2）试剂盒测定H9c2细胞中ROS、LDH、MDA、SOD的水平;（3）JC-1法检测线粒体膜电位（MMP）;（4）Annexin-FITC/PI法结合流式细胞仪检测细胞凋亡率;（5）Fluo-3 AM结合流式细胞仪检测Ca2+离子荧光强度。（3）体外培养H9c2心肌细胞,构建缺氧/复氧损伤（H/R）模型,将细胞分为5组:正常组（Control组）,模型组（H/R组）,田蓟苷给药组（Til组）,p53激动剂组（Nutlin-3a组）,田蓟苷联合p53激动剂给药组（Til+Nutlin-3a组）。（1）实时荧光定量PCR测定H9c2细胞p53、NOX4、Bax、Bcl-2 m RNA的表达;（2）免疫蛋白印迹法检测H9c2细胞p53、NOX4、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白的表达;（3）免疫荧光测定p53、NOX4蛋白定位与表达。结果:（1）在H/R条件下,CCK-8结果显示田蓟苷浓度为20μg/m L时细胞活力最高（P＜0.01）;ROS测定结果显示,H/R组中ROS水平显著增加（P＜0.01）,给予Til后ROS生成被显著抑制（P＜0.01）;PCR及WB结果显示,与Normal组相比,H/R组中p53、NOX4 m RNA和蛋白表达明显上升（P＜0.01）,Nrf2 m RNA表达明显下降（P＜0.05）,HO-1表达增加（P＜0.01）;与H/R组比较,Til组p53、NOX4 m RNA和蛋白表达明显下降（P＜0.01）,Nrf2、HO-1 m RNA表达明显上升（P＜0.01,P＜0.05）（2）CCK-8结果显示,激动剂Nutlin-3a浓度为10μM时细胞活力最高（P＜0.01）;与Normal组相比,H/R组的LDH、ROS、MDA水平显著上升（P＜0.01）,SOD活力显著降低（P＜0.01）,与H/R组相比,Til组可以显著抑制LDH、ROS、MDA水平（P＜0.01）,增强SOD活力（P＜0.01）,与Til组相比,Nutlin-3a组的LDH、ROS、MDA水平显著上升（P＜0.01）,SOD活力显著降低（P＜0.01）,Til+Nutlin-3a组不同程度地逆转Nutlin-3a的促氧化作用,表明p53介导了氧化应激反应,田蓟苷发挥了较好的抗氧化作用;与Normal组相比,H/R组的MMP显著降低（P＜0.01）,凋亡率和Ca2+离子荧光强度显著上升（P＜0.01）,与H/R组相比,Til组可以显著增强MMP（P＜0.01）,显著抑制凋亡率和Ca2+离子荧光强度（P＜0.01）,与Til组相比,Nutlin-3a组的MMP显著降低（P＜0.01）,凋亡率和Ca2+离子荧光强度显著上升（P＜0.01）,Til+Nutlin-3a组不同程度地逆转Nutlin-3a的促凋亡作用,表明p53介导了细胞凋亡效应,田蓟苷发挥了较好的抗凋亡作用。（3）PCR及WB结果显示,H/R组中p53、NOX4、Bax的m RNA和蛋白表达明显上升（P＜0.01）,Bcl-2的m RNA和蛋白表达明显下降（P＜0.05,P＜0.01）、Nrf2和HO-1蛋白表达显著上升（P＜0.05,P＜0.01）,与H/R组相比,Til组可以显著抑制p53、NOX4、Bax m RNA和蛋白表达（P＜0.05,P＜0.01）,增强Bcl-2的m RNA和蛋白表达（P＜0.01）,进一步增强Nrf2、HO-1蛋白表达（P＜0.01）,与Til组相比,Nutlin-3a组的p53、NOX4、Bax的m RNA和蛋白表达显著上升（P＜0.05,P＜0.01）,Bcl-2的m RNA和蛋白表达明显下降,Nrf2、HO-1蛋白表达被显著抑制（P＜0.01）,Til+Nutlin-3a组不同程度地逆转Nutlin-3a对p53、NOX4、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1的作用。结论:以上结果表明,Nutlin-3a促进ROS、MDA、LDH生成,抑制SOD水平和抗氧化基因Nrf2、HO-1蛋白表达,促进线粒体损伤、钙超载和细胞凋亡,提示p53的激活参与H/R诱导的H9c2细胞氧化应激损伤和凋亡效应,而田蓟苷可以不同程度地抑制Nutlin-3a的以上作用,以此发挥对H/R诱导的H9c2细胞损伤的保护作用,这种保护作用的内在机制可能与田蓟苷调节p53/NOX4通路有关。