蜂胶降血糖有效部位化学成分研究

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蜂胶(propolis)是蜜蜂科昆虫意大利蜂Apis mellifra L的干燥分泌物,多为团块或不规则碎块状,多数呈棕色、棕褐色或灰褐色,具光泽,气味芳香,味苦,嚼之有辛辣感。蜂胶中含有大量的黄酮类化合物,且黄酮类化合物具有多种生理活性:降血酯、降血糖作用;改善血液微循环;提高免疫力;抗菌消炎、祛痰、解热、消肿;抗病毒,抑制和消灭肿瘤等。本课题组的前期工作表明,蜂胶的醇粗提物具有较好的降血糖活性。随后应用活性示踪法确定了降血糖的有效部位,结果发现黄酮类化合物是蜂胶降血糖有效部位的主要成分。本文以河南蜂胶为研究对象,选用正交试验方法,运用综合加权评分法进行数据分析,优选出蜂胶总黄酮的提取工艺,得到蜂胶降血糖的有效部位;为了进一步阐明蜂胶降血糖有效部位的化学物质基础,综合采用硅胶柱色谱、制备液相色谱和SephadexLH-20葡聚糖柱色谱等分离手段从有效部位中分离得到9个化合物;综合分析各个单体化合物的UV、13C-NMR、1H-NMR、HPLC等波谱数据,鉴定了全部9个化合物,分别为:良姜素(Ⅰ),柚木杨素(Ⅱ),乔松素(Ⅲ),高良姜素(Ⅳ),白杨素(Ⅴ),山萘酚(Ⅵ),槲皮素(Ⅶ),阿魏酸(Ⅷ)和山萘酚-4’-甲醚(Ⅸ)。通过链脲佐菌素、四氧嘧啶引起的小鼠和大鼠高血糖模型进行药理实验,进一步研究蜂胶总黄酮的降血糖的药理活性,测定两种化学方法引起的高血糖模型动物的血糖、肝糖原、总胆固醇、胰岛素等指标水平,实验结果表明蜂胶总黄酮有效部位具有良好的降血糖作用。全文得到以下结论:1以河南蜂胶为原料,用10倍量体积90%乙醇,提取3次,每次24h得到蜂胶醇提物。蜂胶醇提物用35倍量的1%氢氧化钠溶解,碱提取液用浓盐酸调pH至7,产生大量沉淀,静置过夜,滤过,沉淀减压干燥,磨成细粉,最终提取物的总黄酮含量在50%以上。2将蜂胶降血糖有效部位用不同有机试剂萃取,再综合运用硅胶柱层析色谱,SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析色谱以及半制备液相柱层析色谱等分离手段,从中分离得到9个单体化合物,最后通过UV,EI-MS,13CNMR,1HNMR, HPLC等分析手段鉴定了单一化合物的结构;并用HPLC法分析蜂胶降血糖有效部位及9个单体化合物,确定各单体化合物在蜂胶有效部位总物质谱上的位置。3建立链脲佐菌素、四氧嘧啶引起的大、小鼠高血糖模型,以正常大、小鼠为空白对照,口服给予20-160mg/kg不同剂量蜂胶总黄酮,测定各模型组动物血糖、肝糖原、总胆固醇和胰岛素水平。结果表明蜂胶总黄酮各剂量组具有明善降低链脲佐菌素、四氧嘧啶引起的大、小鼠高血糖血糖的作用,并能提高其胰岛素水平,降低其胆固醇含量。本论文系统、全面研究了蜂胶降血糖有效部位的制备,有效部位的成分分离及结构鉴定,通过药效学实验研究其降血糖活性,为将来开发具有自主知识产权的新药奠定实验基础。
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