【摘 要】
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目的:明确不同温度保存脂肪无细胞提取物(Fat Acellular Extract,FAE)对人皮肤成纤维细胞(Human Skin Fibroblast,HSF)增殖和迁移能力的影响,为临床应用提供参考。方法:使用大侧孔(2.0mm×7.0mm)吸脂针获取脂肪颗粒,1200g离心3分钟去除油层和肿胀液,通过内径2.0mm的Luer-Lock连接器机械乳化30次,1200g离心5分钟丢弃油层、脂肪
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目的:明确不同温度保存脂肪无细胞提取物(Fat Acellular Extract,FAE)对人皮肤成纤维细胞(Human Skin Fibroblast,HSF)增殖和迁移能力的影响,为临床应用提供参考。方法:使用大侧孔(2.0mm×7.0mm)吸脂针获取脂肪颗粒,1200g离心3分钟去除油层和肿胀液,通过内径2.0mm的Luer-Lock连接器机械乳化30次,1200g离心5分钟丢弃油层、脂肪层和细胞碎片,0.22μm针式过滤器过滤得到FAE。使用BCA法测定总蛋白浓度。分装后分别在4℃、-20℃和-80℃无菌保存30天。常规培养HSF至第3-4代对数生长期。每孔分别加入新鲜FAE(Fresh)和静置复温至室温的4℃(4℃组)、-20℃(-20℃组)、-80℃(-80℃组)保存的FAE各20μL,以无菌PBS溶液20μL为对照(空白对照组),常规培养24小时,CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术和Flow Jo软件分析细胞周期变化,划痕实验和Image J软件测量评估细胞迁移能力。蛋白含量吸光度值、细胞增殖率、细胞迁移率和周期百分比以平均值±标准差表示。采用SPSS 19.0软件进行统计分析。各组数据均进行正态性检验,数据符合正态分布的,组间比较采用单因素方差分析,数据不符合正态分布的,使用Kruskal-Wallis秩和检验;两两比较方差齐采用LSD法进行比较,方差不齐采用Dunnet-T3进行比较。P<0.05表示差异具有统计学意义,P<0.01表示差异显著。结果:1、FAE外观:新鲜制备的FAE在4℃、-20℃、-80℃保存30天后,颜色随着保存温度降低逐渐变浅。2、FAE总蛋白浓度为3.32±0.05mg/m L。3、细胞增殖:4℃、-20℃、-80℃保存30天的和新鲜FAE均可促进HSF增殖(P<0.05),4℃组的促HFS增殖作用比-20℃组和-80℃组更强(P<0.05和P<0.01),而-20℃组和-80℃组的作用相同(P>0.05)。4、细胞周期分析:4℃、-20℃、-80℃保存30天的和新鲜FAE处理HSF24小时,与对照组比较,均减少G0/G1期细胞,S期、增加G2/M期细胞(P<0.05),4℃组的变化比-20℃组和-80℃组更明显(P<0.05),而-20℃组和-80℃组的变化相同(P>0.05)。5、细胞迁移:4℃、-20℃、-80℃保存30天的和新鲜FAE均可促进HSF迁移(P<0.05),4℃组的作用比-20℃组和-80℃组更强(P<0.05),而-20℃组和-80℃组的作用相同(P>0.05)。结论4℃、-20℃、-80℃保存的FAE均可促进细胞增殖和迁移,以4℃保存的作用最为显著。
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