猪牙皂花果生物学研究

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猪牙皂(Gleditsia sinensis OFFICINALIS)为皂荚(G.sinensis)的无性系品种,本意指其果实不育,弯曲,似猪牙状。这种果实味辛、咸,温;有小毒。归肺、大肠经,具有祛痰开窍,散结消肿的功效。猪牙皂果虽与大皂角为同一物种的果实,但猪牙皂果多生于猪牙皂植株(嫁接皂荚),而大皂角多生于皂荚。全面研究植物的生物学特性,有利于了解该物种的适应性进化和繁殖策略等,为更好的利用遗传资源提供理论依据。然而,目前国内外对于猪牙皂的研究多为药理活性方面,对于其自身的生物学特性及猪牙皂果的形成机制研究较少。本研究以山东邹城猪牙皂种植基地为实验基地,在野外定点观测猪牙皂植株的外部形态、物候期、开花结果动态等;采集样品回实验室对其花芽分化、雄蕊不育、种胚败育等现象进行实验观察,并对其繁育系统进行评估,初步对褐化前期的猪牙皂果与大皂角进行转录组分析。主要研究结果如下:(1)猪牙皂为嫁接繁殖。其树体一般无枝刺、叶为一回兼二回羽状复叶、果实多为猪牙形,与皂荚明显区分。物候期各阶段早于皂荚,与雄株花期错位,容易造成受粉障碍。(2)猪牙皂芽分为枝芽、花芽和混合芽,其枝芽主要着生于一年生枝,花芽和混合芽主要着生于二至多年生枝。4月新芽开始活动,6月芽内部开始分化。将猪牙皂花芽的分化过程划分为花芽形成初期、花序形成期、小花原基形成期及花器官形成期。花器官形成为向心式,由外向内依次分化花萼、花冠、雄蕊和雌蕊原基。(3)猪牙皂花两性,但雄蕊败育,为功能性雌花。其雄蕊小孢子发育过程中小孢子母细胞只进行核分裂,不伴随质分裂,形成一多核原生质团,后期解体消失,不能正常产生小孢子;同时花药内绒毡层异常增大向内挤压,最终形成一狭窄的空腔。小花未开时具两种形态:柱头外伸与柱头不外伸。柱头在开花前就具一定的可授性,柱头外伸延长了可受粉时间。但由于花期错位,柱头不外伸的花更有受粉机会。(4)通过观察记录开花动态及人工授粉,测得猪牙皂OCI值为4,P/O值为4363.1。确定猪牙皂的繁育系统为异交,需要传粉者。人工授粉实验中,人工授正常雄花花粉所结果实都为大皂角,套袋不授粉所结果实都为猪牙皂果,进一步证实受粉不良是形成猪牙皂果的原因之一。(5)猪牙皂所结果实有两种,多为猪牙皂果,也有少量的大皂角。果实都经过伸长期、膨大期、褐化期、成熟期。在胚珠发育过程中,猪牙皂果内胚珠的珠柄稍伸长后不再变化,胚珠逐渐发黄萎蔫,其珠被解体、胚囊退化,最终解体败育。(6)对同一猪牙皂植株褐化前期的猪牙皂果(ZYZ)与大皂角(ZJ)进行转录组测序,共获得了128459599个raw reads,经过质控得到127620355个clean reads,转录本拼接后得到134008个transcript和49512个unigenes。用Nr,Nt,Pfam,KOG/COG,Swiss-prot,KEGG,GO七大数据库对所得到unigenes进行基因注释,有34347个unigenes至少在一个数据库中注释成功。以padj<0.05或|log2Fold Change|>1挑选差异表达基因,筛选出622个差异表达基因,其中表达上调414,表达下调208。对筛选出的差异表达基因进行GO、KEGG富集分析,其在植物激素信号转导途径、类黄酮生物合成等途径相关基因表达差异显著。本文对猪牙皂植株生物学特性进行了全面系统的研究,对后续深入探究猪牙皂果的形成机制、皂荚遗传多样性等研究提供理论背景及资料参考。
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