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目的:⑴探讨超声造影(CEUS)检查技术对肾皮质实性肿瘤及肾盂肿瘤的有效诊断指标及诊断效率。⑵重组腺相关病毒(rAAV)载体在肾细胞癌(RCC)基因治疗领域具有前景,但转染率低下限制其应用。本研究探索超声靶向破坏微泡(UTMD)技术能否提高rAAV在肾癌细胞(786-0)的转染率,为rAAV应用于RCC基因转染研究提供实验依据。
方法:①对121例<5cm的实性肾皮质肿瘤及28例肾盂占位进行CEUS检查。应用Sequoia512超声仪,探头4C1-S,对比脉冲序列(CPS)造影模式,机械指数0.21,声诺维(SonoVue)剂量0.8~1.2ml。CEUS前进行常规超声检查,声像图上分析病变回声、大小及血流形态。②不同条件UTMD预辐照rAAV2,与未预辐照组比较,确定UTMD是否会损伤rAAV2感染活性;不同条件UTMD辐照786-0细胞,辐照结束即刻测定细胞生存率,观察UTMD参数对细胞生存率的影响;联合UTMD及rAAV2感染786-0细胞,研究不同声强,辐照时间,微泡体积,病毒MOI对转染率的影响,观察延迟效果,探索相应机制。
结果:⑴在CEUS图像上利用消退相高增强和不均匀增强的有效指标诊断≤5cm肾细胞癌(RCCs)的特异性及敏感性分别为91.3%和84.8%、57.5%和60.3%,前者有助于提示富血供的透明细胞RCCs亚型,CEUS较CECT及MRI更敏感反映这类肿瘤的微循环灌注;CEUS能明确诊断肾柱肥大。CEUS对肾盂肿瘤的检出特异性达100%,敏感性87%,较常规超声(80%,65.2%)明显提高;密集增强的肾盂肿瘤易于检出,浸润状增强的病变提示浸润性肾盂癌。⑵1×104~1×106MOI的rAAV2在786-0细胞的转染率为17.28±2.44%。当UTMD的声强≤2W/cm2,时间≤120s,微泡体积≤60μl,频率1MHz,占空比(DC)50%,脉冲重复频率(PRF)100Hz时,UTMD辐照不会损伤rAAV2感染活性。
结论:①CEUS有助于富血供透明细胞RCCs及肾柱肥大的定性诊断、肾盂肿瘤的正确检出及与非肿瘤占位的鉴别诊断。②UTMD技术安全有效提高了rAAV2载体在肾癌细胞的转染效率,其机制为增加了病毒进入细胞的数量。