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伪狂犬病毒（Pesudorabies virus,PRV）是引起多种家畜和野生动物以发热、奇痒（猪除外）、脑脊髓炎和神经系统症状为主要特征的高度接触性传染病,给我国猪业生产带来巨大损失。MicroRNAs是非编码小RNA的一种,一般含有22个核苷酸,利用自身碱基与mRNA的序列结合,降解或者阻碍其靶向蛋白质的翻译,达到调控机体基因的作用。目前发现很多疾病的发生发展往往伴随着miRNA的异常表达,比如肿瘤、心血管系统、表观遗传学等。核甘酸结合寡聚化结构域（nucleotide-binding oligomerization domain,NOD）是NOD样模式识别受体（NOD—like receptors,NLRs）家族一员,与Toll样受体（TLRs）家族不同的是,NOD存在于细胞浆中,对侵入细胞内的病原体及其衍生物进行识别。NOD样受体和Toll样受体（TLRs）还可以协同对病原体产生免疫反应。为了探究PRV在宿主中对不同组织嗜性的差异,本实验将稀释度为106的PRV-XJ株病毒液以0.1ml注射量(0.18×LD50),通过大腿肌肉注射的方式感染体重180g大鼠。待感染后110小时后,大鼠出现嗜睡,精神状况极差,共济失调,在笼子中抓鼻挠耳、转圈、抽搐等症状。处死老鼠,采取脾、肺、肾、小脑、大脑、嗅球等组织。通过建立PRV gE基因的荧光定量PCR检测方法,对不同组织中的PRV进行检测。结果显示,不同组织中的病毒含量存在明显差异,肺脏中含量最高,其次是神经细胞丰富的大脑、小脑以及嗅球中的病毒含量较高,肾脏和脾脏的病毒含量相对很低。大鼠感染PRV-XJ株后采取嗅球、肺脏和脾脏抽提RNA,利用HiSeq2500高通量测序方法筛选出符合要求的miRNAs,并对PRV-XJ感染前后不同组织中miRNAs的表达量进行测定,通过相互比较,得到差异表达的miRNAs以及具有组织特异性差异表达miRNAs。利用生物信息学软件对组织特异性差异表达miRNAs的靶基因、基因注释、以及生物学功能进行分析,探究在伪狂犬病毒感染后这些差异表达的miRNAs在机体抗病毒、病毒复制中所起得作用。HiSeq2500高通量测序结果表明,嗅球、肺脏和脾脏中差异表达了29、61、199个miRNAs,并且发现了15、42和171个嗅球、肺脏和脾脏组织特异性表达miRNAs。在嗅球中,有3个组织特异性miRNAs表达上调和6个组织特异性表达下调以及6个不保守的差异表达的miRNAs。在肺脏中,出现了13个组织特异性miRNAs表达上调,10个下调和19个不保守的miRNAs差异表达。脾脏组织特异性表达miRNAs中,31个上调,58个下调,其他82个差异表达是不保守miRNAs。通过GO、KEGG等对这些miRNAs的靶基因预测以及功能的注释,发现这些组织特异性miRNAs参与调控神经系统、呼吸系统以及免疫系统等生理活动。同时差异表达miRNAs也靶向机体中的很多通路中节点蛋白序列,从而调控机体抗病毒机制,影响PRV病毒在不同组织中扩增、定殖。通过对测序组织中miR-122-5p的表达量对比分析发现,miR-122-5p在三个组织中的表达情况差异明显,嗅球中相对于空白组表达量正常,而肺脏中上调了46.6倍,在脾脏中上调高达146.0倍,通过生物信息学靶基因预测结果显示miR-122-5p能靶向NOD2样蛋白序列。基于此结果,本试验将miR-122-5p转染293T细胞,从而过表达miR-122-5p,然后利用荧光定量PCR方法检测NOD2蛋白mRNA的表达量,与空白组对比观察其变化情况,同时检测NOD2下游蛋白和部分细胞因子的mRNA变化。结果显示miR-122-5p能够靶向NOD2,过表达miR-122-5p,可使NOD2蛋白低表达,同时用荧光定量PCR检测NOD2通路下游蛋白的mRNA表达量,发现下游蛋白RIP2以及细胞因子IL-6和IL-8相对于空白组也出现差异表达,证实了miR-122-5p能作用NOD2样蛋白,从而调控NOD通路,影响机体抗病毒应答。