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目的：研究证明Wnt信号通路的异常活化与肿瘤的发生发展密切相关。细胞表面卷曲蛋白(Fzd)是Wnt通路的特异性受体，通过β-连环蛋白(β-catenin)激活其下游的一系列信号来刺激肿瘤细胞的生长。分泌型卷曲相关蛋白(SFRPs)是Wnt通路的主要拮抗因子，通过与Fzd受体竞争结合Wnt蛋白而抑制Wnt通路的进行。最近研究发现SFRPs家族在多种肿瘤细胞中呈现低表达，与肿瘤细胞中sf-rps基因启动子发生甲基化密切相关。DNA甲基化转移酶(DNMTs)是参与DNA甲基化过程的关键酶，DNMTs基因高表达可能促使某些抑癌基因启动子区发生甲基化使其转录失活，促进肿瘤的发生。青蒿琥酯(ART)是青蒿素的衍生物，是治疗疟疾的特效药，近年的研究表明青蒿琥酯还具有抗多种肿瘤细胞的作用。本实验通过用青蒿琥酯处理K562细胞，研究SFRPs家族、DNMTs家族基因的表达水平及经典Wnt通路中β-catenin蛋白的表达水平，进一步研究青蒿琥酯抑制K562细胞增殖的机制。
方法：利用MTT法检测不同浓度的青蒿琥酯对K562细胞的增殖抑制作用；利用AnnexinV/PI双染及流式细胞术检测青蒿琥酯处理K562细胞48h的凋亡率及细胞周期的变化；用RT-PCR法检测不同浓度的青蒿琥酯(0、4、10、20、40μg/ml)处理K562细胞48h对sfrpl、sfrp2、sfrp4和dnmtl、dnmt3a、dnmt3b的mRNA相对表达水平，用Western blotting法检测β-catenin蛋白的表达水平。
结果：
1、青蒿琥酯可显著抑制K562细胞增殖，诱导细胞发生凋亡。ART作用48时，终浓度4μg/ml的ART对K562细胞的生长抑制率达54.29％，10μg/ml的ART对K562细胞的生长抑制率达58.03％，与4μg/ml组比较抑制率增加;20μg/ml的ART对K562细胞的生长抑制率达69.33％，与前述各组相比，抑制率明显增强；终浓度40μg/ml的ART对K562细胞的生长抑制率达77.98％，与其余各组相比，抑制率显著增加。
2、不同浓度ART处理K562细胞48小时后，4μg/ml组K562细胞凋亡率达15.87±2.48％，与0μg/ml组比较凋亡率增高;10μg/ml组K562细胞凋亡率达21.90±2.29％，与4μg/ml组比较凋亡率增高;40μg/ml组K562细胞凋亡率达49.47±5.08％，明显高于其他组。
3、不同浓度ART处理K562细胞48小时后收集各浓度组细胞，用流式细胞仪检测各组细胞周期分布及处于细胞周期各阶段的细胞数，并对各浓度组进行两两比较，发现随着药物浓度增加，G2/M期细胞数目明显增多，G0/G1+S期细胞减少。
4、ART处理K562细胞48小时后，用RT-PCR法检测0、4、10、20、40μg/ml浓度组sfrp1、sfrp2、sfrp4及dnmt1、dnmt3a、dnmt3b的mRNA相对表达水平，结果提示SFRPs家族中sfrp1、sfrp2、sfrp4的mRNA表达水平呈升高趋势，dnmt1、dnmt3a、dnmt3b的mRNA表达水平呈下降趋势。Westem blot显示，β-catenin蛋白的表达水平呈浓度依赖性降低。
结论：青蒿琥酯处理K562细胞后，SFRPs家族mRNA水平表达增加，DNMTs家族mRNA水平表达减低，推测青蒿琥酯可能通过抑制K562细胞DNMTs家族的表达，发挥去甲基化作用，使sfrps基因启动子甲基化程度降低，使SFRPs表达增加，与Fzd受体竞争结合Wnt蛋白，抑制了经典Wnt通路的持续激活，进而使β-catenin表达下降，可能是青蒿琥酯抑制K562细胞增殖的机制之一。本实验为青蒿琥酯治疗白血病提供了新的理论依据。