复方双苓止泻散对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用及对PepT1表达的影响

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溃疡性结肠炎(UC),也称作非特异性溃疡性结肠炎,以慢性、复发性结肠粘膜炎症为特点,还没有明确的病因和有效的治疗措施直接阻断UC的病生理过程。UC的临床特征包括黏液脓血便,血便,腹泻,腹痛,里急后重等。细胞因子,粘附分子,炎症介质,氧自由基等参与UC的发病。寡肽转运蛋白PepT1属于肽转运蛋白家族(PTR)是生物体内细胞吸收二肽、三肽的必不可少的膜蛋白。正常情况下PepT1表达在近端小肠细胞纹状缘膜上,而结肠很少或几乎不表达。寡肽转运蛋白PepT1是质子依赖性的转运蛋白。小肽转运到细胞内,主要水解成游离氨基酸,并经门静脉入血。因此,PepT1在营养供需调节方面起到关键性作用。另外,PepT1还负责吸收和分配大量有药理学活性的重要化合物,包括β-内酰胺类抗生素,血管紧张素转化酶抑制剂,抗肿瘤和抗病毒药物。发现二肽、三肽转运蛋白PepT1在炎症结肠表达,但诱因和基本机制仍不清楚。目的:研究PepT1在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的大鼠结肠炎中的表达及病理学机制。观察纯中药制剂复方双苓止泻散的治疗机制,及在UC中抗炎,抑菌,调节免疫功能,治疗腹痛和腹泻的效果。方法:将SD大鼠随机分为9组,每组10只,包括正常对照组(Ngroup)、其它建立模型后,分为腹泻模型3天、6天组(3dDM,6dDM group),分别自由饮水3天、6天;阴性对照3天、6天组(3dNC,6dNC group),分别灌胃给予生理盐水3天、6天;复方双苓止泻散3天、6天组(3dD,6dDgroup),分别灌胃给予复方双苓止泻散3天、6天,0.31g/kg,每天2次;阳性对照3天、6天组(3dPC,6dPC group),分别灌胃给予万鑫母仔快康3天、6天,0.31g/kg,每天2次。取末端结肠组织样本,HE染色观察病理改变。评价DAI和HI评分。用免疫组化和免疫印记技术检测PepT1的蛋白表达情况,RT-PCR技术检测PepT1mRNA表达水平,并比较分析不同组之间的差异。结果:模型组大鼠结肠病理改变接近人类UC病变。大鼠出现严重的腹泻,甚至血便,黏液脓血便。一般状况低下,体重减轻。HE染色结果表明,结肠结构发生典型的炎症改变,像粘膜充血,结肠增厚,上皮缺失,腺体破坏,溃疡,腺窝扩大,杯状细胞减少,以及大量巨噬细胞,淋巴细胞,浆细胞等炎症细胞浸润。给予复方双苓止泻散和万鑫母仔快康后能明显改善结肠炎症状。N,3dDM,6dDM,3dNC,6dNC,3dD,6dD,3dPC,6dPC各组DAI评分分别为0±0,3.734±0.263,3.635±0.191,3.702±0.189,3.568±0.164,2.297±0.104,1.199±0.233,2.365±0.191,1.232±0.225。模型组DAI评分明显高于对照组(P<0.05)。与模型组相比,NC(3天、6天)组没有统计学差异(P>0.05);D(3天、6天)组DAI评分明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);PC(3天、6天)组DAI评分明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3dD组明显高于6dD(P<0.05)。3dPC组明显高于6dPC(P<0.05)。3dD和3dPC组没有明显统计学差异(P>0.05)。6dD和6dPC组没有明显统计学差异(P>0.05)。N,3dDM,6dDM,3dNC,6dNC,3dD,6dD,3dPC,6dPC各组HI评分分别为0.1±0.316,7.5±1.179,7.2±0.919,7.6±0.843,7.1±0.994,4.9±0.994,2.5±0.707,5.2±0.919,2.6±0.699。模型组HI评分明显高于对照组(P<0.05)。与模型组相比,NC(3天、6天)组没有统计学差异(P>0.05);D(3天、6天)组HI评分明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);PC(3天、6天)组HI评分明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3dD组明显高于6dD(P<0.05)。3dPC组明显高于6dPC(P<0.05)。3dD和3dPC组没有明显统计学差异(P>0.05)。6dD和6dPC组没有明显统计学差异(P>0.05)。免疫组化结果表明除了对照组无表达外,其它各组PepT1主要表达在结肠上皮细胞胞质内。免疫印记和RT-PCR结果显示,对照组无PepT1表达;DM和NC组PepT1表达水平明显高于药物干预组(P<0.05);3dD组表达水平明显高于6dD组(P<0.05);3dPC组表达水平明显高于6dPC组(P<0.05);3dD组与3dPC组之间没有统计学差异(P>0.05);6dD组与6dPC组之间没有统计学差异(P>0.05)。结论:1SD大鼠饮用DSS7天后成功诱导了结肠急性炎症。2PepT1在炎症结肠粘膜上皮高表达,在UC的发病中起到重要作用。3复方双苓止泻散能降低DAI和HI评分,有效减轻DSS诱导的急性结肠炎症状。
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