骨髓基质细胞治疗脑缺血过程中血管内皮生长因子对其趋化性作用的实验研究

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目的:体外分离培养骨髓基质细胞(BMSCs),5-溴脱氧尿苷(BrdU)体外标记细胞,观察其不同时间点的标记率;线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型(MCAO),TTC染色及HE染色确定脑缺血部位;枕大池注射BMSCs及血管内皮生长因子(VEGF),探讨BMSCs枕大池注射治疗MCAO中VEGF对其趋化性作用。方法:从2月龄大鼠的后肢骨骨髓中取原代BMSCs,经体外扩增培养、鉴定,BrdU体外标记细胞并观察标记率。线栓法制作大鼠MCAO模型(n=30), 2h后再灌注。24h后BMSCs治疗组(n=10)及BMSCs+VEGF治疗组(n=10)枕大池注射1×106个BMSCs,对照组(n=10)枕大池注射生理盐水。48h、72h、96h时BMSCs+VEGF组分3次枕大池注射VEGF20ng。每组分别在1周和4周的时间点上各取5只大鼠经心脏灌注后取脑固定,石蜡包埋,在前囟附近切4um厚脑片2张,分别做HE染色和BrdU免疫组织化学染色,观察不同处理组梗塞灶周围的BrdU免疫组织化学染色阳性细胞数。结果:BrdU标记BMSCs在24h、48h及72h的标记率分别为43%、58%、96%。生理盐水组各时间点未见明显阳性细胞。2个治疗组在1周时梗塞灶周围的BrdU阳性细胞数目均较4周时多。在治疗1周和4周时,应用BMSCs+VEGF治疗组均较单独应用BMSCs治疗组在梗塞灶周围的BrdU阳性细胞数目多。P<0.001,差异有显著性意义。结论:BrdU标记BMSCs在标记72h时标记率较高,达到96%。BMSCs枕大池注射治疗大鼠MCAO时,移植细胞向脑缺血部位迁移,加用外源性VEGF对BMSCs向梗塞灶周围迁移有趋化性作用。
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