【摘 要】
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目的:探讨RNA干扰下调MeCP2基因后对人肺癌A549细胞RASSF1A和C/EBPα基因表达及对细胞增殖能力的影响。方法:根据MeCP2的mRNA碱基序列设计并合成短发夹RNA(shRNA),构建质粒表
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目的:探讨RNA干扰下调MeCP2基因后对人肺癌A549细胞RASSF1A和C/EBPα基因表达及对细胞增殖能力的影响。方法:根据MeCP2的mRNA碱基序列设计并合成短发夹RNA(shRNA),构建质粒表达载体,用阳离子脂质体法体外转染A549细胞,筛选出稳定转染的细胞株,RT-PCR法检测MeCP2抑制效果及RASSF1A和C/EBPα表达的变化,MTT法检测转染后细胞增殖能力的变化。结果:成功构建了靶向MeCP2的真核表达载体pSilencer- MeCP2/Ⅰ和pSilencer- MeCP2/Ⅱ,与空白组相比,pSilencer- MeCP2/Ⅰ和pSilencer- MeCP2/Ⅱ组均可有效抑制MeCP2基因mRNA的表达,抑制率分别为53.8﹪和58.5﹪,C/EBPα表达分别上调约115﹪和135﹪,且pSilencer- MeCP2/Ⅰ和pSilencer- MeCP2/Ⅱ组细胞增殖能力明显减弱(P<0.05),而RASSF1A的表达在各组细胞中未见明显变化(P>0.05)。结论:肺癌A549细胞中MeCP2基因的表达可被RNA干扰载体有效抑制,进而导致细胞中与增殖和凋亡相关基因C/EBPα的表达上升,细胞增殖能力减弱。
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