【摘 要】
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目的:通过探讨Erastin对双打击弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞增殖、铁死亡、自噬及凋亡的影响,明确自噬参与Erastin诱导铁死亡的作用,进一步证实铁死亡在Erastin诱导的细胞凋亡中的重要作用,为临床应用铁死亡诱导剂治疗弥漫大B细胞淋巴瘤提供新的理论依据和实验基础。方法:1.CCK8法检测Erastin对弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞生存率的影响;2.应用Western blo
【基金项目】
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山西省回国留学人员科研资助项目“P53基因调控弥漫大B细胞淋巴瘤细胞铁死亡的分子机制研究（编号:2020-194）”；
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目的:通过探讨Erastin对双打击弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞增殖、铁死亡、自噬及凋亡的影响,明确自噬参与Erastin诱导铁死亡的作用,进一步证实铁死亡在Erastin诱导的细胞凋亡中的重要作用,为临床应用铁死亡诱导剂治疗弥漫大B细胞淋巴瘤提供新的理论依据和实验基础。方法:1.CCK8法检测Erastin对弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞生存率的影响;2.应用Western blot检测Erastin对弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4、ACSL4和FTH的表达,流式细胞术检测活性氧ROS变化;3.应用Western blot检测Erastin在对弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞自噬标志性蛋白LC3BⅡ/Ⅰ、Beclin-1和p Beclin-1的表达,用5 m M自噬抑制剂3-MA预处理细胞30 min,再用40μM Erastin共处理24 h后检测LC3BⅡ/Ⅰ和FTH的表达;4.2μM Ferrostatin-1预处理细胞30 min,40μM和80μM Erastin共处理24 h后,流式细胞术检测ROS的水平,Western blot检测LC3BⅡ/Ⅰ和FTH的表达;5.流式细胞术检测细胞凋亡水平,应用Western blot检测Erastin处理后弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase 3、Bcl-2和c-Myc的表达;6.流式细胞术检测Erastin对弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞周期的影响;7.2μM Ferrostatin-1预处理细胞30 min,40μM和80μM Erastin共处理24 h后,流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:1.CCK8结果显示Erastin作用于弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞24 h后,能够以剂量依赖的方式抑制细胞生存率,IC50分别为22.74μmol/L、13.89μmol/L;2.Erastin抑制铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4和FTH的表达,促进ACSL4的表达上升以及活性氧ROS堆积,表明Erastin诱导弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞发生铁死亡;3.Erastin诱导弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞自噬标志性蛋白LC3BⅡ/Ⅰ、和p-Beclin1的表达上调,发生自噬;自噬抑制剂3-MA可以逆转由Erastin引起的自噬流LC3BⅡ/Ⅰ上调以及FTH的下调,说明Erastin诱导的铁蛋白重链（FTH）下调是由自噬介导的;4.2μM Ferrostatin-1预处理细胞30 min后,可以抑制由40μM和80μM Erastin引起的ROS堆积,以及可以抑制由40μM Erastin引起的LC3BⅡ/Ⅰ上调和FTH表达下调,表明Erastin诱导的铁蛋白重链（FTH）下调是由ROS介导的自噬引起的;5.AnnexinⅤ-FITC、PI染色显示Erastin能够促进弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞凋亡率显著增加,WB结果显示Erastin促进弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞cleaved caspase3表达上调、促进Bcl-2和c-Myc表达下调,这些结果表明Erastin诱导DHL-DLBCL凋亡;6.Erastin可以诱导弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞G1期阻滞;7.2μM Ferrostatin-1预处理细胞30 min后,可以逆转由40μM Erastin引起弥漫大B细胞淋巴瘤RC和LY19细胞凋亡。结论:1.Erastin诱导双打击弥漫大B细胞淋巴瘤细胞SLC7A11表达下调,从而引起GPX4辅因子GSH合成减少,导致ROS堆积,诱导铁死亡;2.Erastin诱导的ROS介导DHL-DLBCL细胞自噬;3.自噬途径介导铁蛋白重链FTH表达下调,导致细胞内铁离子水平上升;4.Erastin诱导的凋亡能够清除G1期阻滞的DHL-DLBCL细胞;5.Erastin诱导的ROS能够介导DHL-DLBCL细胞凋亡。
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