基于ISSRs的盐肤木遗传多样性研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dreamagain1986
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盐肤木(Rhus chinensis)是漆树科(Anacardiaceae)盐肤木属(Rhus)落叶灌木或小乔木,是中药材五倍子蚜虫的寄主植物,也是我国重要的经济树种。本论文包含两部分内容:(1)盐肤木ISSR-PCR反应体系建立及引物筛选;(2)基于ISSRs的安徽省盐肤木资源的遗传多样性研究。运用正交试验设计和单因素分析方法,建立并优化了盐肤木ISSR-PCR反应体系。结果表明,盐肤木最佳ISSR-PCR反应体系为总体积20μL,包含模板DNA(5-10ng/μL)2.0μL、引物(10μmol/L)0.6μL、d NTP(10 mmol/L)0.2μL、Mg2+(25 mmol/L)2.8μL、Taq DNA聚合酶(5U/μL)0.3μL、10×PCR缓冲液2.5μL、HPLC超纯水11.6μL。最佳ISSR-PCR扩增程序;94℃预变性5 min;40个循环;94℃变性40 s;54℃退火40 s;72℃延伸1.5 min;最后72℃延伸2 min;4℃保存。利用已建立的最佳反应体系,从80条ISSR引物中,筛选出了14条多态性高、谱带清晰、重复性好的引物,用于进一步研究。基于ISSR标记技术,对安徽省6个盐肤木居群共150个样本单株进行了遗传多样性研究,运用14条ISSR引物共检测出201个多态性位点。物种水平上,多态性位点百分率PPLs=100%,有效等位基因数nes=1.324,Nei’s基因多样性指数(期望杂合度)Hes=0.225,Shannon多态性信息指数Is=0.370。居群水平上多态性位点百分率PPLp=67.83%,有效等位基因数nep=1.282,期望杂合度Hep=0.178,Shannon多态性信息指数Ip=0.280。居群间遗传分化系数Gst=0.21;AMOVA分子方差分析结果显示,居群间与居群内遗传变异分别占总变异的31.47%与68.53%,表明安徽省盐肤木的遗传变异主要表现在居群内个体间的遗传差异上,但居群间也表现了一定程度的遗传分化。UPGMA聚类分析将6个盐肤木居群明显地区分开来,但居群的分组情况与地理分布没有关联。本研究还发现了一些盐肤木种源的特异性ISSR条带,可用于种源鉴定。本研究揭示了安徽省盐肤木遗传多样性和群体间遗传分化均处于中等水平,提出了盐肤木遗传资源的保护利用策略。研究结果将为安徽省盐肤木的遗传资源档案建立、种质资源保护交流和可持续利用、杂交育种中的亲本选配等提供可靠的理论依据和实践指导。
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