【摘 要】
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目的:探讨胰激肽原酶(pancreatic kininogenase,PK)对H2O2诱导的人近端肾小管上皮(human kidney proximal tubular epithelial,HK-2)细胞损伤的保护作用。方法:体外培养HK-2细胞株,将HK-2细胞随机分为4组:对照组(Control,CON)、H2O2(500uM)组、PK(6pg/mL)组和 H202+PK 组,每组处理时间为
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目的:探讨胰激肽原酶(pancreatic kininogenase,PK)对H2O2诱导的人近端肾小管上皮(human kidney proximal tubular epithelial,HK-2)细胞损伤的保护作用。方法:体外培养HK-2细胞株,将HK-2细胞随机分为4组:对照组(Control,CON)、H2O2(500uM)组、PK(6pg/mL)组和 H202+PK 组,每组处理时间为 24h。使用细胞增殖-毒性检测法(CCK-8)检测各组细胞活力;二氯二氢荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法结合流式细胞法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;使用流式细胞法检测HK-2细胞凋亡率;免疫印迹法检测超氧化物歧化酶2(SOD2)、NADPH氧化酶4(NOX4)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、自噬相关因子轻链蛋白3B(LC3B)和Beclin-1、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果:与CON组相比,H2O2组HK-2细胞活力降低,ROS表达增加,SOD2蛋白表达降低,NOX4、TGF-β1、MCP-1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、Beclin-1 蛋白表达增加,细胞凋亡率增加,Bcl-2/Bax蛋白表达降低(均P<0.001);与H2O2组相比,H2O2+PK组HK-2细胞活力增加,ROS表达降低,SOD2蛋白表达增加,NOX4、TGF-β1、MCP-1、LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达降低,细胞凋亡率降低,Bcl-2/Bax蛋白表达升高(均P<0.01),差异均具有统计学意义。结论:胰激肽原酶对H2O2诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用,其机制与胰激肽原酶抑制TGF-β1表达、抗氧化应激、调节自噬以及抗凋亡有关。
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