【摘 要】
：
研究背景及目的肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是世界上恶性程度最高、致死率最高的癌症之一。由于早期诊断困难、术后复发和转移的可能性很高,HCC患者的预后非常差,HCC的肿瘤发生发展分子机制尚未完全阐明,因此鉴定关键的HCC生物标志物确定潜在的治疗靶标对HCC的早期诊断和改善患者预后至关重要。乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶（Glyoxylate reductase
【基金项目】
：
科技部重大科技专项:乙肝相关肝癌早期免疫诊断关键技术研发和应用,项目号:2018ZX10302205,资助金额:1041.72万元,2018.01-2020.12； 河南省医药科学研究院2020年度基本科研业务费项目:GRHPR抑制肝细胞癌发展的功能及机制研究，项目号:2020BP0111； 河南省重点研发与推广专项项目:GRHP
论文部分内容阅读
研究背景及目的肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是世界上恶性程度最高、致死率最高的癌症之一。由于早期诊断困难、术后复发和转移的可能性很高,HCC患者的预后非常差,HCC的肿瘤发生发展分子机制尚未完全阐明,因此鉴定关键的HCC生物标志物确定潜在的治疗靶标对HCC的早期诊断和改善患者预后至关重要。乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶（Glyoxylate reductase/hydroxypyruvate reductase,GRHPR）是一种同源二聚酶,属于D-2-羟基酸脱氢酶超家族。关于GRHPR的研究主要集中于原发性高草酸尿症,在癌症中的研究较少。现有的研究表明GRHPR在多种癌组织中低表达,如乳腺癌、大肠癌、肾透明细胞癌和HCC,提示其可能是个潜在的抑癌基因。虽然已有研究表明GRHPR在HCC中低表达,但是该研究并未阐明其在HCC中的生物学功能和相关的分子机制。因此本课题首先通过构建稳定过表达GRHPR的HCC细胞株,探究GRHPR对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响,再通过寻找其上游靶miRNA,揭示GRHPR受miRNA调控影响HCC发展的生物学功能,最后结合下游信号通路阐明GRHPR抑制HCC细胞增殖转移的分子机制。为GRHPR在临床HCC诊断与治疗中的应用提供理论基础,给HCC患者的治疗提供新的思路。研究方法1.通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测HCC患者癌组织和癌旁组织中GRHPR的表达。2.利用慢病毒感染构建稳定过表达GRHPR的HCC细胞株,通过CCK-8细胞增殖、克隆形成、细胞周期、伤口愈合、Transwell迁移和侵袭实验检测GRHPR过表达对体外HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。3.利用裸鼠皮下成瘤实验探究GRHPR过表达对体内HCC肿瘤生长的影响。4.利用生物信息学预测GRHPR的上游miRNA,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-138-5p与GRHPR的靶向关系。5.Mi R-138-5p mimic/inhibitor转染HCC细胞,通过CCK-8细胞增殖、Transwell迁移和侵袭实验检测miR-138-5p对体外HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。6.过表达GRHPR慢病毒和miR-138-5p mimic/inhibitor共转染HCC细胞,通过CCK-8细胞增殖、Transwell迁移和侵袭实验验证miR-138-5p是否参与了GRHPR对体外HCC细胞增殖、迁移和侵袭能力的调控。7.通过Western blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达,探究GRHPR、miR-138-5p以及过表达GRHPR慢病毒和miR-138-5p mimic/inhibitor共转染对体外HCC细胞PI3K/AKT信号通路的影响。研究结果1.GRHPR在HCC患者癌组织中的m RNA和蛋白表达水平均显著低于癌旁组织。2.GRHPR过表达显著抑制了体外HCC细胞的增殖、克隆形成、细胞周期G1/S期转变以及迁移和侵袭;抑制裸鼠体内肿瘤生长。3.Mi R-138-5p是GRHPR的上游靶miRNA。4.过表达miR-138-5p促进体外HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,下调miR-138-5p结果相反。5.GRHPR受miR-138-5p调控抑制体外HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。6.GRHPR过表达显著降低PI3K蛋白磷酸化（p-PI3K）和AKT蛋白磷酸化（p-AKT）水平,抑制HCC细胞中PI3K/AKT信号通路的活性。Mi R-138-5p表达上调激活PI3K/AKT信号通路;miR-138-5p表达下调抑制PI3K/AKT信号通路活性。GRHPR抑制PI3K/AKT信号通路活性受到miR-138-5p的调控。研究结论1.GRHPR过表达抑制体外HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制裸鼠体内肿瘤生长。2.GRHPR受miR-138-5p调控,通过PI3K/AKT信号通路抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。
其他文献
研究目的探讨妊娠期糖尿病中Clq/肿瘤坏死因子相关蛋白5（CTRP5）与肥胖、糖脂代谢、胰岛素抵抗以及不良妊娠结局的关系。对象和方法选择2020年6月至2021年12月在郑州大学第二附属医院就诊的妊娠期糖尿病（GDM）120例患者为实验组,同期孕检的糖耐量正常（NGT）孕妇120例为对照组。使用全自动生化仪检测,包括甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白
背景与目的出生缺陷是影响出生人口素质的全球性公共卫生问题。大部分的单基因遗传病都会引起新生儿残疾、畸形甚至死亡,是导致出生缺陷的重要原因之一。越来越多的出生缺陷人口数量不仅给家庭带来经济和精神压力,也给公共卫生带来巨大的负担。世界卫生组织（WHO）提出了“三级预防”措施以减少出生缺陷的发生。其中孕前扩展性携带者筛查（Preconception expanded carrier screening,
针对深空探测器任务规划中多子系统协同机制中的多约束问题，提出一种深空探测任务规划认知图谱构架及多属性约束冲突检测方法。采用图表示方法实现任务规划的知识建模，将状态转移图解构为三元组实现任务规划过程中的规则匹配，并基于图模型推理方法提出多属性约束冲突检测算法，从而实现多子系统任务规划的认知推理和约束冲突检验。使用不同规模的深空探测任务规划算例对本文方法进行了仿真实验，实验结果显示与遗传算法、传统启发
研究背景:根据Global Cancer Observatory数据显示,肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）在各种癌症类型中全球发病率列第六位、死亡率列第三位。目前治疗HCC的主要方法包括手术切除、放射治疗、药物化疗、肝脏移植及联合治疗等。但因其较高的侵袭性和复发率,对肝细胞癌的防治效果并不理想。HCC细胞耐药性是影响治疗效果的主要原因之一,研究其耐药机制迫在眉睫
背景和目的放射治疗作为一种常用的肿瘤治疗方式,其疗效取决于放射治疗处的放射敏感性。然而在放疗期间,肿瘤乏氧微环境往往会限制活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的产生,导致其产生含量通常不足以有效抑制癌细胞的生长。由于肿瘤部位的代谢活性高且富含葡萄糖,葡萄糖氧化酶（Glucose oxidase,GOD）可以将肿瘤部位的葡萄糖氧化为葡萄糖酸与过氧化氢（Hydrogen p
针对集群弹药协同攻击地面目标时，打击时间不一致会导致“打草惊蛇”、任务失败的问题，本文基于双层优化模型提出了一种适用于该场景的集群任务规划方法。所提出方法下层优化为航迹规划，上层优化为任务分配，提高了任务规划结果的最优性。考虑到在真实战场环境中，飞行时间过长会增加被敌方发现的风险，将速度变量引入航迹规划，使集群弹药在不增加冗余路径的前提下完成满足时间约束的协同攻击任务。本文以集群弹药协同攻击地面群
研究背景与目的输血相关移植物抗宿主病（Transfusion associated graft versus host disease,TA-GVHD）是一种少见但致命的潜在并发症,具有免疫活性的供体T淋巴细胞随血液输入患者体内后不断增殖活化,可造成GVHD的迅速进展,目前临床上针对GVHD尚无有效疗法。因此,输血前对血制品进行γ射线辐照,灭活有免疫活性的淋巴细胞是预防TA-GVHD的有效手段。但
自2020年新冠疫情爆发以来全球经济受到较大冲击,我国各行各业也面临着较大的竞争压力和经营风险,企业想要在复杂多变的外部环境下和激烈的行业竞争中脱颖而出,需要不断规划发展战略、扩大经营规模、抢占市场份额。而企业发展战略的实施和完成离不开雄厚的资本加持,因此如何能快速和顺利地实现上市,融资变得越发重要,借壳上市作为能够帮助中小企业实现快速上市的一种方法,曾经备受企业青睐,但借壳上市也有一些自身的局限
对多个动目标持续跟踪成像是高轨遥感卫星的重要任务之一。为此，文章提出了高轨遥感卫星对多个动目标持续跟踪的任务规划方法。以卫星姿态机动次数和姿态机动角最小为优化目标，以卫星对动目标持续跟踪的起始、终端状态、服务次数约束及时间分配的限制为约束，建立高轨遥感卫星姿态机动对多个动目标的调度模型。在此基础上，采用遗传算法生成高轨遥感卫星在每个任务周期对多个动目标调度的任务序列，结合九宫格跟踪算法完成对多个动