贵州凯里酸汤食用频次对大鼠非酒精性脂肪肝的影响及机制探究

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目的:凯里酸汤为贵州黔东南地区经辣椒、番茄发酵而成的风味美食,深受当地人民喜爱,目前已经纳入国家级非物质文化遗产,本课题对黔东南地区人群进行流行病学调查,当地人民喜食酸汤,其非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)患病率明显低于全国平均水平。本研究通过高脂饮食建立SD大鼠非酒精性脂肪肝模型,酸汤进行干预,探讨凯里酸汤对非酒精性脂肪性肝病糖、脂代谢的影响及相关机制研究。方法:将32只7周龄SD雄性大鼠随机分为4组(每组8只):正常对照组(ND,普通饲料)、高脂模型组(HF,高脂饲料)、每天灌胃酸汤组(HS1,高脂饲料,并每天灌胃酸汤)、隔天灌胃酸汤组(HS2,高脂饲料,并隔天灌胃酸汤),灌胃前煮沸酸汤,冷却至室温,按1ml/100g剂量灌胃,未灌胃酸汤组予生理盐水按同等剂量灌胃。12周后,测量各组大鼠空腹血糖水平,并处死各组大鼠,称量体重、肝湿重,收集血液、肝、回肠组织。生化分析仪测定各组大鼠血清学生化指标丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Spartate transaminase,AST)、甘油三酯(Triglycerides,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(High-density lipoprotein cholesterol,HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平,HE(Hematoxylin-eosin staining)及油红O(Oil red O)染色观察肝脏、回肠组织病理学改变。ELISA(Enzyme linked immunosorbent assay)检测血清白细胞介素6(interleukin 6,IL-6),白细胞介素8(interleukin 8,IL-8),肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)水平、胰岛素(Insulin,INS)水平,蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)检测肝脏炎症相关蛋白Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、信号转导与转录激活蛋白(Signal Transducer And Activator Of Transcription 1,STAT1)、p-STAT1,回肠紧密连接蛋白(Zonulaoccludens-1,Zo-1)、Occludin-1,糖代谢通路蛋白磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Serine/threonine protein kinase,Akt)、p-Akt的表达。利用实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,q PCR)检测肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体α(Peroxisome proliferators-activated receptorα,PPAR-α)、固醇调节元件结合蛋白-1c(Sterol regulatory element-binding protein-1c,SREBP-1c)m RNA的表达。结果:与ND组比较,HF组体重、肝湿重、肝指数显著升高,空腹血糖、血清INS、胰岛素抵抗指数显著升高,HF组ALT、AST、TG、TC、LDL-C显著升高,HDLC显著降低,血清炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α水平显著升高,HE及油红O染色显示肝细胞形态不规则,肝细胞索排列紊乱,炎性浸润,胞质内大量脂滴沉积,糖代谢相关PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达显著降低,肝脏脂质代谢相关基因SREBP-1c m RNA表达水平显著升高,PPAR-αm RNA表达水平显著降低,肝脏炎症相关蛋白TLR4、STAT1、p-STAT1表达显著增加,回肠组织绒毛部分出现断裂、融合、腺体扩张、上皮细胞水肿、核增大,回肠Zo-1、Occludin-1蛋白表达显著降低;与HF组比较,酸汤干预后上述指标有所改善,且HS1组较HS2组改善明显。但HS1、HS2组与ND组比较仍有部分指标有显著性差异,证明酸汤干预后的NAFLD并未完全恢复至正常水平,但具有明显改善作用。结论:凯里酸汤通过影响相关糖、脂代谢信号通路,改善NAFLD大鼠的体重、血糖、血脂、炎性指标,保护肠粘膜屏障。
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