E1A基因对宫颈癌裸鼠移植瘤放射敏感性影响的实验研究

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目的:1.探讨E1A基因对宫颈癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响及相关机制。2.为提高宫颈癌的放射治疗疗效提供实验依据,并为肿瘤的基因治疗提供初步理论依据。方法:细胞培养:人宫颈癌HeLa细胞在37℃,5%CO2条件下培养于含10%小牛血清,RPMI-1640培养液的培养瓶,将对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞接种于裸鼠右侧肩胛下皮下,每只接种2×106个细胞,建立裸鼠移植瘤模型。每日观察肿瘤生长情况,每三天测量一次肿瘤的长短径,计算肿瘤体积,V=1/2×(ab2)。分组处理:待每组肿瘤平均直径约10mm时,随机将裸鼠分为三组,E1A实验组:瘤内注射EIA质粒与PEI-Fe3O4纳米粒的胶体溶液0.2ml:空载体对照组:瘤内注射PEI-Fe3O4纳米粒空载体0.2ml:空白对照组:瘤内注射无菌生理盐水0.2ml。两天后开始放疗:将每组裸鼠分别进行照射,6-MV X-ray源皮距100cm 2Gy/次×5天,剂量率2Gy/min,总剂量10Gy,每天观察肿瘤缩小情况,同样每三天测量一次肿瘤体积,处死前测瘤体积,算出每组肿瘤缩小率=(放疗前平均瘤体积-放疗后平均瘤体积)/放疗前平均瘤体积;处死裸鼠取标本称瘤重,算出各组平均瘤重。标本制成病理切片,TUNEL法测瘤组织中细胞凋亡情况,计算每组的凋亡指数;免疫组化测survivin蛋白表达。结果:1.接种HeLa细胞后第7天开始成瘤,至第12天成瘤率达100%。2.照射前E1A组,纳米粒空载体组,空白对照组肿瘤体积分别为:302.28±37.48 mm3,326.57±57.34 mm3,317.95±86.93 mm3,照射结束后,处死裸鼠前E1A组,纳米粒空载体组,空白对照组肿瘤体积分别为46.50±29.04 mm3,222.4±37.47 mm3,202.83±67.51mm3,肿瘤缩小率分别为84.62±14.25%,31.90±8.42%,36.21±7.76%。瘤重分别为:148.1±69.7mg,434.9±38.7mg,394.3±88.6mg,E1A组肿瘤缩小率明显高于对照组,瘤重明显低于对照组,有统计学意义(p<0.05),空载体组与空白对照组比较无明显差异(p>0.05)。3.TUNEL法测不同组中细胞凋亡情况,E1A组中凋亡细胞明显多,凋亡指数为32.07±4.48%,而空载体组及空白对照组中凋亡细胞明显少,分别为13.93±1.31%,14.02±0.98%,有统计学意义(p<0.05)。4.免疫组化测组织中survivin的表达,E1A组中survivin蛋白表达呈弱阳性,而空载体组及空白对照组中survivin蛋白表达呈强阳性。结论:1.E1A基因能增加宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的放射敏感性。2.E1A基因通过下调宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤中survivin的表达而促进细胞凋亡,可能为E1A基因增加放射敏感性的机制之一。
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