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目的:通过构建SD大鼠的急性毒死蜱中毒模型,观察SD大鼠海马体神经元细胞焦亡相关蛋白的表达,探讨细胞焦亡在毒死蜱中毒导致的中枢神经损伤过程中的影响;通过观察海马体神经元中P65/NF-κB蛋白的表达,研究NF-KB信号通路在其过程中的影响。方法:取100只成年雄性健康SD大鼠。将其中的70只SD大鼠构建急性毒死蜱中毒模型,并按照体重随机分成七组（control组、8h组、1d组、2d组、3d组、5d组、7d组）每组十只。全部禁食12h后,对照组（c ontrol组）给予橄榄油灌胃,其他实验组按照给药浓度81.5mg/kg（1/2LD50）进行毒死蜱-橄榄油灌胃处理。灌胃后每日称量体重并观察大鼠的一般状况和中毒情况。根据分组的时间点麻醉处死对应组别的大鼠并取抗凝心脏全血待用,每组中五只做Western Blot检测NLRP3、GDSDMD、ca spase-1蛋白和P65/NF-k B信号通路蛋白的表达,另外五只制备海马体组织病理标本。将30只SD大鼠按体重完全随机分成五组,每组六只。分为control组、CPF组、CPF+DMSO组、CPF+QNZ组、CPF+MCC950组。全部禁食12h后,对照组（control组）给予橄榄油灌胃,其他实验组按照给药浓度81.5mg/kg（1/2LD50）进行毒死蜱-橄榄油灌胃处理并在灌胃后20min之后腹腔注射相对应的其他试剂。观察一般状况和中毒情况,在48h（2d）的时间点时处死SD大鼠做Western Blot操作检测相关蛋白在抑制剂作用下的表达。结果:1.SD大鼠急性毒死蜱中毒模型构建成功,染毒后出现嘴角流涎、流泪、背毛潮湿、大小便失禁等毒蕈碱样症状和全身多处肌肉抽搐的烟碱样症状。症状在染毒后20分钟内出现,呈逐渐加重趋势,大约48h-72h症状最严重,之后症状开始逐渐减轻,第5d症状基本缓解。2.乙酰胆碱酯酶活力测定2.1血浆乙酰胆碱酯酶活力测定:与control组相比（6.55±0.33U/ml）,染毒组血浆中的乙酰胆碱酯酶（Ach E）活力在中毒后8h（2.5 2±0.68U/ml,P＜0.05）明显降低,2d（1.84±0.46 U/ml,P＜0.05）时降到最低水平,中毒后3d（2.96±1.47U/ml,P＜0.05）开始有所恢复,但仍明显低于对照组。5d（4.69±1.80U/ml,P＞0.05）、7d（4.78±1.79U/ml,P＞0.05）时的Ach E活力虽然仍比control低,但和对照组相比已经没有明显的统计学差异。2.2海马体组织乙酰胆碱酯酶活力测定:与control组相比（0.92±0.01U/ml）,染毒组的海马体组织中Ach E活力在中毒后8h迅速降低（0.28±0.14U/ml,P＜0.05）,之后1d（0.45±0.05U/ml,P＜0.05）时便开始恢复,中毒后3d（0.88±0.02U/ml,P＞0.05）、5d（0.90±0.05U/ml,P＞0.05）组与control组无明显差异。3.硫堇染色结果:Control组的SD大鼠的海马体神经元经硫堇染色后神经元排列整齐,形态完整,可以看到明显的轴突结构;而染毒后的各组的海马体神经元硫堇结果显示与control组相比染毒后8h即有了变化,神经元的排列开始变得松散无序;2d组、3d组、5d组神经元明显排列紊乱,部分神经元细胞出现细胞质肿胀,轮廓模糊的形态学改变;7d组的海马体神经元与5d组的相比较数量开始增多,排列恢复整齐,形态学改变减轻。4.大鼠海马体神经元细胞焦亡相关蛋白Western Blot结果:4.1 NLRP3蛋白的表达（NLRP3/β-actin）随着中毒时间延长逐渐增多,在2d和3d时表达量（NLRP3/β-actin）最高,之后逐渐下降。其中,8h组、1d组、2d组、3d组、5d组和对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）,7d组和对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。4.2 caspase-1蛋白的表达（caspase-1/GAPDH）随着中毒时间延长逐渐增多,在第3d时表达量（caspase-1/GAPDH）最高,之后逐渐下降。其中,8h组、1d组、2d组、3d组、5d组和对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）,7d组和对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。4.3 GSDMD蛋白的表达（GSDMD/β-actin）随着中毒时间延长逐渐增多,在2d时表达量（GSDMD/β-actin）最高,之后逐渐下降。其中,8h组、1d、2d、3d、5d组和对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）,7d组和对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。5.caspase-1蛋白表达的免疫组化结果SD大鼠海马体神经元中caspase-1蛋白的表达量在染毒后短时间（8h）内升高,并随着时间延长逐渐增多,在第3d和5d时最高,之后随着时间的延长逐渐减少。其中,8h、1d、2d、3d、5d、7d组和对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）。6.GSDMD蛋白表达的免疫荧光染色结果对照组GSDMD蛋白在海马体神经元胞质中的表达较低,胞浆内未见明显颗粒;8h组GSDMD蛋白表达开始增强,胞浆内可见少量颗粒聚集;1d组GSDMD表达明显增强,呈颗粒聚集现象;2d组表达最强;5d组时也可见聚集状颗粒,但聚集现象已经开始恢复。7.腹腔注射NLRP3抑制剂（MCC950）对相关蛋白表达的影响:SD大鼠腹腔注射NLRP3抑制剂（MCC950）后,注射抑制剂组与未注射抑制剂的实验组相比:NLRP3的表达（NLRP3/β-actin）降低,具有统计学意义（P＜0.05）,caspase-1的表达（casepase-1/GAPDH）降低,具有统计学意义（P＜0.05）,GSDMD的表达（GSDMD/β-actin）降低,具有统计学意义（P＜0.05）,P65的表达（P65/β-actin）略有降低,但不具有统计学意义（P＞0.05）。8.大鼠海马体神经元NF-κB信号通路相关蛋白P65的Western Blot结果:8.1 P65蛋白的表达（P65/β-actin）随着中毒时间延长呈逐渐增多趋势,在2d时达到最高,之后随着中毒时间延长呈逐渐减少趋势。其中,2d组、3d组、5d组和对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）,8h组、1d组、7d组和对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。8.2腹腔注射NF-κB抑制剂QNZ对相关蛋白表达的影响注射抑制剂组与未注射抑制剂的实验组相比:NLRP3的表达（NLRP3/β-actin）略有增多,但不具有统计学意义（P＞0.05）;caspase-1的表达（casepase-1/GAPDH）降低,具有统计学意义（P＜0.05）;GSDMD的表达（GSDMD/β-actin）增多,具有统计学意义（P＜0.05）;P65的表达（P65/β-actin）增多,具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.急性毒死蜱中毒会引起SD大鼠血浆和海马体组织中的乙酰胆碱酯酶活力的改变。2.急性毒死蜱中毒早期激活了海马体神经元细胞焦亡反应,不同焦亡蛋白之间的相互作用参与了毒死蜱诱导的海马体神经元损伤过程。3.NF-κB信号通路参与了毒死蜱诱导的海马体神经元损伤过程中的细胞焦亡反应过程。4.通过适当的调节焦亡过程中的部分蛋白的表达可能有利于减轻急性毒死蜱中毒导致的海马体神经元损伤。