鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）是人体肠道分离的乳杆菌属益生菌,具有提高人体免疫力、预防和治疗胃肠道感染、腹泻、肠易激综合征、炎症性肠病、呼吸道感染、牙齿硬组织进行性病损等疾病的功能。鼠李糖乳杆菌能产生细菌素,其具有杀菌功能,对致病菌的生物被膜具有清除作用,有望成为新型的抗菌物质。在益生菌生产应用中,细菌高密度发酵技术能通过设置各种发酵参数,在短时间内使培养的菌株细胞达到很大的生物量,以此来提高菌株增殖的效率,这在益生菌的生产应用上具有重要意义。本文从实验室保存的乳杆菌菌剂中分离抑菌效果较好的菌株,并对其进行分类鉴定,分析其溶血活性、抗生素敏感性、抑菌活性、在人工模拟胃肠液中的耐受性、疏水性、自聚力和抗氧化性等特征。此外,构建了高密度发酵体系,对菌株进行高密度发酵,以提高其生物量,并从中分离出具有抗菌作用的细菌素,进一步探索此细菌素对铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）浮游菌的抑菌效果及其对生物被膜的抑制作用。结果表明,分离获得的抑菌效果较好的菌株为鼠李糖乳杆菌菌株,命名为CLK 101,其对大多数抗生素敏感,在p H为2、3的人工模拟胃液中培养0-3 h时存活率皆在85%以上,在p H为6.8的人工模拟肠液耐受力达到96%以上,菌株发酵液和菌株发酵上清液具有较好的抗氧化活性,是一株安全、对胃肠道环境耐受的益生菌。经鉴定鼠李糖乳杆菌CLK 101所产细菌素CLK＿01是一种新发现的多肽,分子质量小（701.490 Da）,肽段序列为IKKVTI,属于第二类细菌素,对于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都具有明显的抑制效果,高温耐受能力显著,在酸性条件和中性条件下可以保持较高的活性。针对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌,CLK＿01对浮游菌的MIC为10μg/m L,CLK＿01处理后的细胞残留活力分别为35.61±1.71%和52.09±1.07%。CLK＿01对于生物被膜中活菌的生长抑制效果明显,扫描电镜显示,CLK＿01作用后的细菌细胞变形破裂,内容物溢出,说明CLK＿01对两种致病菌具有生长抑制的作用。以优化后的培养基和生长条件对鼠李糖乳杆菌CLK 101进行高密度发酵,分别进行分批补料发酵和灌流浓缩发酵培养。分批补料发酵在16 h时达到最高活菌量4.45×1011CFU/m L,OD595达到11.38;灌流浓缩发酵在38 h时达到最高含菌量,OD595最高可达到14.07,活菌数为2.36×1012 CFU/m L。可见以上两种高密度发酵模式均可显著提高鼠李糖乳杆菌CLK 101的生物量,且灌流浓缩发酵培养效果更优于补料分批发酵。综上所述,鼠李糖乳杆菌CLK 101是一株安全、有益生作用的菌株,经过高密度培养后,菌株生产效率明显提升,其所产细菌素CLK＿01是一种新型小分子多肽,对致病菌具有较广的抑菌谱,能够有效抑制金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌生物被膜的形成,为抗生素的替代技术提供了一个新的思路。