【摘 要】
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香蕉枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.cubense, Foc)又名香蕉巴拿马病、黄叶病,是由古巴尖镰孢侵染引起的毁灭性土传维管束病害。Foc有4个生理小种,对我国香蕉造成严重危害的
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香蕉枯萎病(Fusarium oxysporum f.sp.cubense, Foc)又名香蕉巴拿马病、黄叶病,是由古巴尖镰孢侵染引起的毁灭性土传维管束病害。Foc有4个生理小种,对我国香蕉造成严重危害的是1号和4号2个生理小种,由于Foc的遗传背景复杂,对其致病机理了解甚少,目前尚无十分有效的防治方法,也未培育出高抗枯萎病的品种,因此,只有深入了解香蕉枯萎病菌的致病性遗传及其变异机制,才能为抗病品种培育及防治策略的制定提供理论依据。本研究利用T-DNA插入技术,建立了香蕉枯萎病菌1号生理小种遗传转化体系,构建了包含1200个突变体的突变体库,并对这1200个突变体进行了致病性测定,对部分致病性丧失突变体、致病性严重减弱突变体、致病性增强突变体进行了T-DNA插入位点右翼序列克隆分析,具体结果如下：1.建立了Focrl-N2菌株(基因组测序用菌株)的T-DNA插入遗传转化体系,并对影响转化效率的因子进行了优化,明确了高效转化的条件为：农杆菌OD600为0.15,AS诱导浓度为150μmol／L,诱导时间为7小时,Focr1-N2孢子浓度为1×106个／ml,潮霉素B筛选的浓度为150μg／mL,诱导培养基pH值为5.5,共培养温度为25℃,共培养时间为48小时为最佳条件。2.建立了包含1200个突变体的突变体库,对1200个突变体进行了致病性测定初步筛选出致病性丧失突变体20个,致病性显著减弱突变体18个,致病性严重增强突变体53个,对粉蕉和巴西蕉致病性均严重增强的突变体2个,对粉蕉致病性严重减弱但对巴西蕉致病力严重增强的突变体1个。3.4个致病性丧失突变体Focrl-N2-65、Focrl-N2-194、Focrl-N2-273和Focr1-N2-328,2个致病性减弱突变体Focr1-N2-71和Focr1-N2-73,3个致病性严重加强突变体Focr1-N2-409. Focr1-N2-418和Focr1-N2-531,采用TAIL-PCR方法对其T-DNA插入位点右翼序列进行了PCR扩增,从这9个突变体中克隆获得15条TAIL-PCR产物,通过测序分析,除Focrl-N2-409外,其余8个突变体的T-DNA位点右翼序列都可在在Focrl-N2基因组序列中找到。本研究成功获得了一批致病性丧失、严重减弱、严重增强突变体,获得了部分突变体的T-DNA插入位点右翼序列,并在1号小种全基因组中找到了其序列,为下一步克隆致病相关基因奠定了良好基础
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