趋化因子(chemokines)及其相应趋化因子受体(chemokine receptors)不仅参与了胚胎发育、淋巴细胞的转运、血管生成等生物体内的各种重要的生命活动,并且在免疫性疾病及各种肿瘤中发挥着关键的不可或缺的作用。大量临床研究表明,乳腺癌患者的乳腺组织与健康人正常乳腺组织相比,CXCR4的表达量明显要高,不仅如此,还发现它的相应配体CXCL12在肝、肺、淋巴结、骨髓等这些癌细胞常转移去的靶器官组织中也均高表达,表明癌细胞表达的趋化因子及其转移的靶器官表达的相应趋化因子受体与靶器官特异转移密切相关。然而,目前关于CXCR4的研究特别是基因表达的研究大部分集中在CXCR4日性细胞和阴性细胞的混合细胞,不能完全了解CXCR4单阳性细胞的基因表达情况。因此,本项研究的目的是拟建立一种用来分离CXCR4单阳性细胞的方法,以方便对其基因表达及体内转移行为的研究。本项研究的方法是通过构建一种双荧光蛋白报告基因载体,并以CXCR4基因启动子驱动绿色荧光蛋白,以小鼠组成性启动子驱动参比报告基因红色荧光蛋白,并以此双荧光蛋白报告基因转染小鼠乳腺癌细胞,经荧光检测验证报告基因活性之后,采用流式细胞仪技术分选CXCR4阳性细胞,进而进行体外培养观察CXCR4阳性和阴性细胞的体外生长特性,为进一步开展CXCR4阳性和阴性细胞的体内转移的研究奠定基础。研究结果表明,双荧光蛋白报告基因载体构建成功,体外活性检测表示所构建的双荧光报告基因载体具有活性。以CXCR4特异性启动子驱动的双荧光蛋白也具有活性。以双荧光蛋白报告基因转染的细胞经流式细胞仪分选后获得了CXCR4阳性细胞和阴性细胞,并且经体外细胞培养观察发现,CXCR4 P日性细胞具有细胞延展性弱、细胞伪足较短,贴壁不牢固等生长特性,CXCR4阴性细胞具有细胞延展性强,细胞伪足较长,贴壁牢固的生长特性。体外培养充分证实CXCR4阳性细胞与CXCR4阴性细胞具有明显的生长模式,这为进一步进行体内研究提供了可靠的依据。本项研究结果的意义还在于,利用基因启动子筛选基因表达阴性和阳性的细胞,相比于用特异性抗体筛选的方法,更有利于保持癌细胞原始性和完整性,有利于体外培养生长,并对移植和肿瘤重建不产生影响；本研究构建的双荧光报告基因载体还可用于其他动物基因启动子的替换,分选不同基因表达的阳性细胞,是一种快捷方便的报告基因载体。并且本研究中克隆的两段CXCR4启动子在乳腺癌细胞中均具有足够启动外源基因表达的活性,所以可以利用CXCR4启动子特异性的在癌细胞中启动治疗基因的表达来实现肿瘤基因治疗的靶向性。并且CXCR4上游500bp大小的启动子具有足够的活性并且序列较短,所以能够增加载体携带外源基因的容量。