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2002 年5 月～2003 年5 月,实施无核葡萄作母本、抗病的中国野生葡萄作父本的杂交组合7 个,无核×无核组合6 个,同时对影响胚挽救效果的取样时期、培养基、培养条件等因素进行了研究,并对胚挽救获得的幼苗进行了移栽定植,2004年以森田尼无核、无核白、克瑞森无核为材料,用不同浓度的植物生长调节物质矮壮素、BA、腐胺和乙烯利并添加矿物元素,在不同时期处理果穗,以促进无核葡萄胚珠的发育,提高胚挽救成苗率。主要取得的研究成果如下: 1.获得一批无核抗病葡萄杂交胚挽救幼苗 运用胚挽救技术,以无核葡萄作母本,中国野生葡萄和欧洲无核葡萄作父本,共进行了13 个组合,获得322 株杂交苗。其中无核葡萄×中国野生葡萄组合7 个,成苗257 株;无核葡萄×无核葡萄组合6 个,成苗65 株。无核抗病杂交后代包括:底来特×江西-3 17 株、底来特×江西-2 18 株、底来特×双优114 株、爱莫无核×泰山-2 32 株、爱莫无核×甘肃-91 26 株、火焰无核×平利-5 15 株、火焰无核×黑龙江实生35 株。不同的杂交结合胚挽救成苗结果差异较大,以底来特、爱莫无核和赫什无核作母本的组合成苗率较高。其中底来特×双优的胚发育率最高,达24.48%,成苗率10.86%。共移栽杂交株系255 个1471 株,出圃211 个株系601 株,温室移栽成活率和苗圃成活率分别为67.0%和83.9%,出圃杂交苗已于2005年春定植大田。 2.优化了胚挽救技术体系 比较了不同杂交组合胚挽救取材时间对成苗的影响。底来特×江西-3 58 天取材的胚发育率高于50 天;赫什无核×火焰无核54 天和58 天取材差异不显著;无核紫×森田尼无核54 天取材的效果优于52 天,底来特×双优51 天取材的优于47天,火焰无核×黑龙江实生50 天取材的优于46 天。研究表明在一定范围内,较晚时期取材接种胚珠,能得到较高的成苗率。对胚挽救的培养基和培养环境条件进行对比,结果表明:在胚珠发育阶段,胚发育宜使用ER 液体培养基,用培养皿作培养容器,进行暗培养,添加2～5 m mol/L 的腐胺有助于底来特胚的发育;在胚萌发阶段宜使用1/2MS 附加IBA 或IAA 0.1～0.2 mg/L 的固体培养基,使用试管作培养容器,光照培养。胚接种在上述萌发培养基中,萌发后能直接成苗,省去转接成苗培养基的步骤,简化培养程序。