胰腺癌是一种恶性程度很高的消化道肿瘤,因其具有早期诊断困难、肿瘤微环境复杂、极易转移和复发等特点,胰腺癌患者的5年生存率往往不足10%。随着人口老龄化的增加和居民生活饮食方式的改变,胰腺癌的发病率也逐年上升。目前,胰腺癌的治疗手段主要为手术切除,但由于多数患者在确诊时肿瘤已发生转移,因此仅有20%的患者拥有手术切除的机会。近年来,针对肿瘤的免疫治疗和靶向治疗显示出了良好的应用前景,但由于当前对胰腺癌的肿瘤特异性诊治靶标的了解还较为有限,目前针对胰腺癌的免疫治疗和靶向治疗研究尚未取得显著进展。因此,探索发现潜在的胰腺癌特异性诊疗靶标对于发展新型胰腺癌诊疗方法具有重要意义。本研究拟通过筛选获得针对人胰腺癌细胞的特异性单克隆抗体,进而基于特异性或功能性抗体开展胰腺癌潜在靶标的发现研究。本研究以人胰腺癌细胞SW1990作为免疫原,通过多种免疫策略结合差异筛选的方式对抗人胰腺癌细胞SW1990单克隆抗体进行筛选。经免疫筛选,本研究共获得9株可特异性结合人胰腺癌细胞SW1990的单克隆抗体,其中5株单克隆抗体为IgG1亚型,4株为IgM亚型。应用流式分析和免疫斑点法,本研究对5株IgG亚型的单克隆抗体进行了反应性和特异性的评价。为评估所获得的5株IgG亚型的单克隆抗体是否具有抗肿瘤活性,本研究应用体内外模型对单克隆抗体的功能进行了验证。在体外细胞模型中,CCK8实验的分析结果显示,SW1990细胞在5株抗体处理6h、12 h、24 h和48 h后均没有显著的细胞活性变化,但在克隆形成实验中,抗体2D8和7C3显示出显著的抑制SW1990细胞集落形成的能力,并且上述抗体抑制SW1990细胞集落形成的能力具有剂量依赖性。本研究进一步通过Transwell和细胞划痕实验对抗体2D8和7C3是否具有抑制SW1990细胞体外迁移的功能进行研究,Transwell分析结果显示,2D8和7C3抗体均具有抑制SW1990细胞体外迁移能力。细胞划痕实验的结果也证实这一结论,同时抗体2D8和7C3抑制SW1990细胞体外迁移的效果具有剂量依赖性。此外,本研究还进一步评价了抗体2D8和7C3对人胰腺癌细胞系HPAF-Ⅱ和人结直肠癌细胞系HT29克隆形成和体外迁移抑制的效果。结果显示,抗体2D8和7C3均能抑制胰腺癌细胞HPAF-Ⅱ和结直肠癌细胞HT29的细胞集落形成。细胞划痕实验的结果也显示,对于结直肠癌细胞HT29,抗体2D8和7C3均能抑制细胞的迁移,但对于胰腺癌细胞HPAF-Ⅱ,仅抗体7C3能显著抑制细胞的体外迁移,抗体2D8的作用效果与对照无显著差异。在体内模型评价中,本研究选择了异位接种SW1990细胞的裸鼠模型进行评价,实验结果表明,抗体2D8和7C3均具有抑制肿瘤生长的效果。本研究进一步开展了抗体2D8和7C3的潜在作用靶点的初步研究。本研究应用Western blot、免疫荧光和免疫共沉淀联合质谱方法进行分析,结果显示,抗体2D8和7C3均能与细胞膜蛋白结合,且抗体2D8和7C3可能结合相同的靶点。但Western blot和免疫荧光的结果显示,抗体2D8和7C3均不与CD166、CD6和CDCP1三个可疑靶点产生反应。抗体2D8和7C3作用的靶点还有待进一步分析。综上,本研究筛选获得了 9株特异性抗人胰腺癌细胞SW1990的单克隆抗体,其中抗体2D8和7C3在体内外模型中均表现出显著的抗肿瘤活性。而在对抗体2D8和7C3作用靶点的初步探索中,本研究发现抗体2D8和7C3均可与细胞膜蛋白结合,但抗体2D8和7C3所作用的靶点仍有待进一步确认。本研究的工作可为胰腺癌治疗性抗体药物的研究提供支持,为进一步基于功能性抗体寻找肿瘤靶标的研究提供基础。