中国明对虾Vg和ALF基因启动子克隆与活性分析

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对虾是我国重要的水产养殖品种之一,但近年来各种疾病频繁发生,这对对虾养殖业造成了巨大的经济损失。卵黄蛋白原(vitellogenin,Vg)和抗脂多糖因子(Anti-lipopolysaccharidefactor,ALF)在对虾生长和抗菌免疫过程中起着重要作用。研究和了解对虾卵黄蛋白原和抗脂多糖因子的调控机理,对对虾人工育苗和养殖产业的发展具有重要的理论价值和现实意义。本文以中国明对虾为研究对象,主要研究内容如下:第1部分:通过DNA步移法克隆了1100bp的Vg基因启动子区和2114bp的ALF基因编码区及上游调控序列序列。分析发现,ALF基因含有两个大小分别为365bp和319bp的内含子,而启动子区为738bp。利用多个网站对核心启动子以及顺式调控元件进行预测,结果显示,两条基因都含有评分为1的+1位和一个TATAbox,未发现有CAATbox和GCbox。此外,在上游调控区都存在着多个可能影响启动子转录活性的顺式作用元件,如NF-κB、YY1和SP1等转录因子结合位点。第2部分:截取不同长度Vg基因和ALF基因启动子片段(PVg和PALF)构建荧光表达载体,转染SF-9细胞来验证其功能。结果表明:4个PVg以及4个PALF驱动的pEGFP表达载体在SF-9细胞内都不能表达荧光,且前者在17β-雌二醇的刺激作用下也不能表达荧光。但后者在脂多糖或β-1,3葡聚糖的刺激下,部分载体能在细胞中表达绿色荧光蛋白。这说明PALF属于诱导型启动子。
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