【摘 要】
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本文对韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga卵黄蛋白的生化特性、纯化和卵黄发生的激素调控进行了初步研究,旨在阐述其卵黄发生的激素调控机制和探明该卵黄蛋白与其他双翅目昆虫
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本文对韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga卵黄蛋白的生化特性、纯化和卵黄发生的激素调控进行了初步研究,旨在阐述其卵黄发生的激素调控机制和探明该卵黄蛋白与其他双翅目昆虫卵黄蛋白之间的关系。利用native-PAGE和SDS-PAGE对韭菜迟眼蕈蚊卵、卵巢、血淋巴和脂肪体中的卵黄(原)蛋白进行了鉴定,PAGE测得卵黄原蛋白(Vg)和卵黄蛋白(Vn)的分子量分别是138.85kDa和148.38kDa,SDS-PAGE测得卵黄蛋白和卵黄原蛋白均由3个分子量相同的亚基组成,分别是75.47kDa、41.49kDa和39.54kDa。先利用硫酸铵沉淀法浓缩卵黄蛋白样品,再经凝胶过滤层析和阴离子交换层析进一步纯化卵黄蛋白,最后经PAGE鉴定得到两条蛋白带,其中分子量较小的蛋白为目的蛋白Vn,另一条则是一种分子量约440kDa的蛋白。两条蛋白带始终没有分离的趋势,推测这两种蛋白存在某种特殊联系,而且440kDa蛋白的分子量约是Vn的3倍,有可能是Vn的三聚体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定了蚊蝇醚、早熟素Ⅱ(抗保幼激素)和植物源蜕皮激素处理的白蛹在不同发育时期脂肪体和卵巢内卵黄(原)蛋白的动态,分析了外源激素对脂肪体和卵巢中卵黄原蛋白合成与吸收的影响。蚊蝇醚(0.8μg /μl)能促进脂肪体合成卵黄原蛋白和卵巢摄取卵黄蛋白;早熟素Ⅱ通过作用于咽侧体抑制保幼激素合成使脂肪体卵黄原蛋白的合成受阻,使卵巢内卵黄蛋白沉积减少;而蜕皮激素则对卵黄蛋白的合成也有一定的促进作用。在用ELISA测定韭菜迟眼蕈蚊蛹不同发育时期卵巢卵黄蛋白动态的基础上,利用高效液相色谱(HPLC)测定了不同发育时期雌蛹体内保幼激素和蜕皮激素的滴度。JH滴度从白蛹到V期上升,至V期最大,然后下降,雌虫体内JHШ的滴度变化与卵黄发生过程中脂肪体内卵黄蛋白含量变化趋势相似,表明JH调控脂肪体合成卵黄蛋白。蜕皮激素从白蛹至灰蛹无明显变化,至黑蛹期却明显上升,似乎与卵黄蛋白的合成或卵巢摄取卵黄蛋白无相关性。
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