冠通方及其拆方对大鼠颈总动脉球囊损伤后TGF-β及其受体影响研究

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目的:观察冠通方及其拆方对大鼠颈总动脉球囊损伤后TGF-β及其受体的影响,探讨冠通方防治(Restenosis,RS)部分机制,为冠通方防治RS提供新的实验依据。实验方法:选取健康雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、假手术组、冠通方组、化瘀拆方组、祛痰拆方组6组,每组又分1天、7天、28天3个亚组。正常组不予处理,假手术组不予球囊损伤,其余各组皆采用球囊内膜剥脱法建立大鼠颈总动脉再狭窄模型。药物干预组均于术前4d按相应药物剂量给药,模型组、假手术组予等量生理盐水灌胃,每日1次,术后连续治疗1天、7天、28天后处死大鼠取材。采用HE染色观察大鼠颈总动脉组织形态结构,透射电镜观察血管组织超微结构,ELISA法检测血清中TGF-β含量,Western blot方法检测颈总动脉组织中TβRⅠ、TβRⅡ的蛋白表达,RT-PCR测定颈总动脉组织中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ的m RNA水平。结果:1.血管形态结构:光镜下,正常组、假手术组和28d冠通方组内膜均未见增生,管腔通畅无狭窄。7d模型组内膜增生,血管稍狭窄,至28天时,管腔狭窄严重。药物干预组血管在术后第7天时均出现内膜增生及轻微狭窄,第28天时管腔通畅,但祛痰拆方组内膜仍有增生。2.血管超微结构:电镜下,正常组和假手术组动脉超微结构无明显差异,内皮细胞较好,平滑肌细胞呈不规则型,肌膜下可见高电子密度的密区。细胞膜完整,胞质内细胞器丰富,可见线粒体。而7d、28d模型组大鼠颈总动脉内皮细胞残缺,平滑肌细胞排列紊乱并向内膜层迁移,粗面内质网扩张,表面核糖体脱落,线粒体部分空泡化。弹性膜被破坏,弹性纤维出现断裂、溶解。1d冠通方组部分内皮细胞残缺,7d冠通方组大鼠颈总动脉平滑肌细胞内核形态正常,无内质网扩张,线粒体未见空泡化,肌层排列整齐。28d冠通方组血管超微结构接近正常组。3.血清中TGF-β含量:正常组、假手术组与28d冠通方组中TGF-β含量均无明显差异。与正常组及假手术组比较,模型组及其余药物干预组大鼠血清中TGF-β含量均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,各药物干预组大鼠血清中TGF-β含量均低于模型组(P<0.05)。在药物干预组之间比较,各药物干预组1d亚组大鼠血清中TGF-β含量未见明显差异(P>0.05),而冠通方组7d、28d亚组血清中TGF-β含量均低于同一时间点的拆方组(P<0.05)。模型组血清中TGF-β含量从1d至7d逐渐上升(P<0.05),7d至28d逐渐下降(P<0.05),各药物干预组TGF-β含量从1d、7d至28d逐渐下降(P<0.05)。4.颈总动脉组织中TβRⅠ、TβRⅡ的蛋白相对灰度值:正常组、假手术组与28d冠通方组TβRⅠ、TβRⅡ的蛋白相对灰度值均无统计学差异(P>0.05)。模型组、其余药物干预组TβRⅠ、TβRⅡ的蛋白相对灰度值均高于正常组(P<0.05)。与模型组比较,各药物干预组TβRⅠ、TβRⅡ的蛋白相对灰度值均低于模型组(P<0.05)。各药物干预组1d亚组之间TβRⅠ、TβRⅡ的蛋白相对灰度值无明显差异(P>0.05),冠通方组7d、28d亚组TβRⅠ、TβRⅡ蛋白相对灰度值均低于同一时间点的化瘀拆方组、祛痰拆方组(P<0.05),28d化瘀拆方组TβRⅡ蛋白相对灰度值低于28d祛痰拆方组(P<0.05)。模型组TβRⅠ、TβRⅡ蛋白相对灰度值从1d、7d至28d逐渐上升(P<0.05)。各药物干预组TβRⅠ、TβRⅡ蛋白相对灰度值1d至7d逐渐上升(P<0.05),7d至28d逐渐下降(P<0.05)。5.颈总动脉组织中TGF-β1 m RNA、TβRⅠm RNA、TβRⅡm RNA表达情况:正常组与假手术组之间,TGF-β1 m RNA、TβRⅠm RNA、TβRⅡm RNA表达均无差异(P>0.05)。与正常组及假手术组比较,1d模型组及各药物干预组、28d药物干预组TGF-β1 m RNA、TβRⅠm RNA、TβRⅡm RNA差异不明显(P>0.05),而7d、28d模型组及7d药物干预组明显增加(P<0.05)。与模型组比较,1d及7d药物干预组无明显差异,28d药物干预组TGF-β1 m RNA、TβRⅠm RNA、TβRⅡm RNA均低于模型组(P<0.05)。各药物干预组大鼠TGF-β1m RNA未见明显差异(P>0.05)。模型组TGF-β1 m RNA、TβRⅠm RNA、TβRⅡm RNA从1d、7d至28d逐渐上升(P<0.05)。各药物干预组TGF-β1 m RNA、TβRⅠm RNA、TβRⅡm RNA表达从1d至7d逐渐上升,7d至28d逐渐下降。结论:1.冠通方防治冠心病PTCA术后再狭窄的作用机制可能与通过降低TGF-β及其受体TβRⅠ、TβRⅡ的表达,改善血管平滑肌细胞的增生迁移及细胞外基质的沉积有关。2.拆方研究表明,冠通方全方组整体效果优于拆方组,说明冠通方组方配伍的合理性,方中活血化瘀药配伍祛痰药具有协同作用,可更有效的防治PTCA术后再狭窄。两拆方组以化瘀拆方组效果最好,提示RS主要病机以血脉受损,血瘀内停为主。
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