论文部分内容阅读
目的:探讨脓毒症大鼠心肌细胞自噬水平,钙通道阻滞剂维拉帕米干预后对脓毒症大鼠心肌细胞自噬水平影响。方法:54只SD大鼠随机分为对照组、脓毒症组、干预组等3个大组,各组再分为6h、12h、24h 3个观察亚组(n=6)。对照组大鼠仅行打开腹腔及缝合腹腔处理,脓毒症组大鼠行盲肠结扎穿孔术后腹腔注射生理盐水,干预组大鼠行盲肠结扎穿孔术后腹腔注射钙离子拮抗剂维拉帕米。行心肌组织HE染色及透射电镜观察超微结构,心肌酶包括肌钙蛋白T(cTnT)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)的测定、Western-Blot及qRT-PCR测定LC3、Beclin-1、Bcl-2蛋白表达及mRNA的相对表达量。结果:1.对照组大鼠心肌组织HE染色光镜下见心肌细胞排列有序、无明显肥大,脓毒症组大鼠心肌组织HE染色见心肌细胞排列紊乱、明显肥大;干预组大鼠心肌组织HE染色见心肌细胞排列紊乱、肥大较脓毒症组减轻。2.透射电镜下见对照组大鼠心肌细胞形态及结构正常,未见自噬体;脓毒症组、干预组大鼠心肌细胞内可见细胞膜破裂,细胞器减少、结构破坏,胞浆内可见空腔、空泡,均可见自噬体及自噬溶酶体。3.6h、12h、24h脓毒症组CK-MB(1086.28±67.14、1501.74±108.83、2263.90±96.86)、cTnT(2.29±0.31、3.77±0.52、5.13±0.46)及干预组CK-MB(878.15±110.29、1063.57±134.21、1912.73±175.25)、cTnT(1.80±0.37、2.77±0.53、3.88±0.63)较对照组CK-MB(479.36±34.54、494.20±63.66、600.54±109.66)、cTnT(0.74±0.22、0.54±0.16、0.56±0.15)表达水平均明显增高,差异有统计学意义(均P<0.05);6h、12h、24h干预组CK-MB、cTnT表达水平均较脓毒症组降低,差异有统计学意义(均P<0.05);4.脓毒症组6h、12h、24h LC3(1.26±0.09、1.59±0.44、1.67±0.21)、Beclin-1(1.28±0.13、1.45±0.19、1.61±0.12)及干预组6h、12h、24h LC3(1.07±0.09、1.17±0.12、1.33±0.09)、Beclin-1(1.13±0.08、1.29±0.10、1.44±0.11)蛋白表达较对照组LC3(0.95±0.06、0.98±0.09、1.03±0.11)、Beclin-1(1.04±0.06、1.14±0.08、1.19±0.21)增高,差异有统计学意义(均P<0.05),脓毒症组6h、12h、24h Bcl-2(0.92±0.12、0.82±0.11、0.70±0.05)的蛋白表达较对照组降低,差异有统计学意义(均P<0.05),干预组6h、24h BCL-2(1.42±0.03、1.01±0.06)蛋白表达较对照组增高,差异有统计学意义(均P<0.05),干预组6h、12h、24h LC3、Beclin-1蛋白表达较脓毒症组降低(均P<0.05);脓毒症组LC3、Beclin-1蛋白表达随时间延长呈进行性增高,脓毒症组Bcl-2蛋白表达随时间延长呈进行性降低,差异有统计学意义(均P<0.05);5.脓毒症组6h、12h、24h LC3(2.41±1.35、4.15±1.27、7.26±1.10)、Beclin-1(2.47±0.64、3.57±0.70、4.90±1.20)和干预组12h、24h LC3(3.60±1.74、5.68±1.30)及6h、12h、24h Beclin-1(1.69±0.50、2.52±0.74、3.55±0.83)mRNA表达较对照组LC3(1.00±0.00、1.00±0.00、1.00±0.00)、Beclin-1(1.00±0.00、1.00±0.00、1.00±0.00)增高,差异有统计学意义(均P<0.05),脓毒症组6h、12h、24h Bcl-2(0.82±0.18、0.55±0.22、0.30±0.15)mRNA表达较对照组(1.00±0.00、1.00±0.00、1.00±0.00)降低,干预组6h、12h、24h BCL-2(2.18±0.28、1.78±0.25、1.39±0.34)mRNA表达较对照组增高,差异有统计学意义(均P<0.05);干预组6h、12h、24h LC3、Beclin-1mRNA表达较脓毒症组降低,6h、12h、24h BCl-2 mRNA表达较脓毒症组增高,差异有统计学意义(均P<0.05);脓毒症组LC3、Beclin-1 mRNA表达随时间延长呈进行性增高,Bcl-2mRNA表达随时间延长呈进行性降低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:脓毒症可有效激活心肌自噬,自噬水平一定时间(24h)内呈上升趋势,未发现自噬在脓毒症病程发展中(24h)对心肌有明显保护作用,予维拉帕米干预后,可减轻脓毒症心肌损害,抑制自噬。