RORα与REV-ERBα在胃癌组织的表达及REV-ERBα对胃癌细胞凋亡的影响

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目的研究RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中表达及其临床意义,并且初步探究REV-ERBα对胃癌发生、发展的分子机制。方法应用免疫组织化学染色实验、Western blot、实时定量PCR实验检测RORα与REV-ERBα在人正常胃组织及不同TNM分期胃癌组织中的表达情况。Mc Nemar检验RORα与REV-ERBα之间表达的关联性,Log-rank test统计REV-ERBα表达量不同的胃癌患者生存曲线。利用Western blot技术检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3,Bcl-2和Bax在人正常胃组织及不同TNM分期胃癌组织表达情况,同时检测REV-ERBα在人正常胃组织及胃癌细胞中的蛋白质表达情况。利用Hoechst染色检测REV-ERBα激动剂GSK4112对人不同胃腺癌细胞处理后的凋亡情况。结果免疫组织化学染色结果显示,与人正常胃组织相比较,RORα与REV-ERBα的表达在人胃癌组织中相对降低,同时RORα与REV-ERBα的表达水平与胃癌患者TNM分期(P=0.013;P=0.010)及有无淋巴结转移(P=0.001;P=0.002)有密切关联性,但与患者年龄、性别及肿瘤大小无关。Western blot结果显示与人正常胃组织相比较,RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中表达水平相对降低,并且与不同TNM分期胃癌组织有关联(P<0.05)。进一步通过实时定量PCR结果示REV-ERBα在人胃癌组织及胃癌细胞中m RNA表达量相对下降,并且也与TNM分期有显著关联(P<0.05)。Mc Nemar检验显示RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中的表达呈正相关性(Kappa=0.377,P=0.007)。Log-rank test反应REV-ERBα高表达的胃癌患者预后明显优于REV-ERBα低表达的胃癌患者(P=0.016)。Western blot条带结果示凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3的表达和人正常胃组织比较,在人胃癌组织中升高,相反Bcl-2的表达与Bcl-2/Bax的比值和人胃正常组织比较,在人胃癌组织中降低。它们均与不同TNM分期胃癌组织有相关性(P<0.05),另一方面,通过细胞实验,Western blot结果示REV-ERBα的表达与人正常胃细胞株(GES-1)比较,在人胃腺癌细胞中蛋白水平明显降低(P<0.05),人胃腺癌细胞株SGC-7901和BGC-823分别用REV-ERBα激动剂GSK4112处理48h后,Hoechst染色显示处理组凋亡细胞数量明显高于对照组(P<0.05)。结论RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中表达降低,并与人胃癌组织的TNM分期及是否有淋巴结转移密切关联。同时,RORα与REV-ERBα可能在人胃癌组织中存在协同表达及调控,进一步研究表明,REV-ERBα的表达与胃癌患者预后有关,REV-ERBα可能通过调控凋亡蛋白Cleaved Caspase-3,Bcl-2,Bax的表达激活线粒体细胞凋亡通路,进而影响胃癌的发生与进展。
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