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研究背景和目的:心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)仍是终末期肾脏病(end-stage renal disease, ESRD)患者的最主要死因。约50%ESRD患者死于心血管疾病。ESRD患者普遍存在血管钙化,血管钙化尤其是冠状动脉钙化是这类患者心血管疾病的重要危险因素,血管钙化会使心血管疾病的发病率和死亡率增加3-4倍。虽然血管钙化曾经被认为是钙、磷代谢失衡所导致的矿物质异位的结果,但现在人们认为血管钙化是一个与骨重塑相似的过程。研究证实,血管平滑肌细胞(VSMCs)向成骨样细胞表型转化在血管钙化过程中具有重要作用。这些成骨样平滑肌细胞中心肌蛋白、平滑肌肌球蛋白重链、平滑肌a-肌动蛋白等平滑肌细胞的特异性标记物的表达减少,而碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、核结合因子α1(Cbfal/Runx2)等骨相关蛋白的表达增加。但到目前为止相关的机制尚未完全阐明。微小RNA(microRNA, miRNA)是Lee等于1993年通过分析突变体线虫的发育时间发现的。miRNA是长约18-25个核苷酸构成的单链非编码RNA。迄今为止,miRBase i记录了超过160个物种的20000个成熟miRNA序列。通过结合靶基因的3’-UTR,miRNA抑制特异靶基因的翻译和(或)促进它们转录的mRNAs的降解,从而负性调节基因的表达。MiRNAs在新陈代谢、分化、细胞凋亡等多个方面发挥着重要作用。研究表明:niRNAs在血管钙化中的作用在于niRNAs与平滑肌细胞表型转换有关。迄今为止,已经报道了miR-30b、miR-30c、miR-125b等miRNAs通过调控VSMCs向成骨样细胞分化来参与血管钙化的发生。miR-208家族有两个成员即]miR-208a和miR-208b。miR-208a由α-心肌肌球蛋白重链基因(Myh6)编码,miR-208b由p-心肌肌球蛋白重链基因(Myh7)编码。目前niR-208b在VSMCs向成骨样细胞分化过程中所起的作用鲜见报道。本实验首先检测miR-208b在终末期肾病患者桡动脉中的表达水平,在此基础上行体外动物实验,进一步研究miR-208b在VSMCs向成骨样细胞分化过程中的作用。方法:收集37例ESRD患者行动静脉瘘手术时的桡动脉标本及11例肾功能正常的患者行胃大部切除手术时的胃左动脉作为对照。茜素红染色测定钙盐沉积,Northern免疫印迹法检测桡动脉和胃左动脉标本中miR-208b的表达水平。体外培养大鼠VSMCs,用β-甘油磷酸钠(p-GP)诱导细胞钙化,分别检测成骨样细胞分化指标碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)和矿化结节量的变化,运用实时定量PCR技术检测miR-208b表达水平的变化,Western免疫印迹法检测Runx2蛋白。用脂质体法将miR-208b mimics和miR-NC分别转染至两组大鼠VSMCs,未转染组作空白对照,用p-GP诱导钙化,同样方法检测ALP活性、OC分泌量、矿化结节量、Runx2蛋白。结果:(1)37例桡动脉标本中发生血管钙化的有20例,发生率为54%,均发生于血管中膜,对照组均无钙化发生。ESRD患者桡动脉miR-208b的表达水平明显低于对照组。(2)β-甘油磷酸钠诱导的VSMCs在向成骨样细胞分化的过程中,ALP活性、OC、Runx2蛋白表达水平明显升高,矿化结节量也明显增多。(3)转染了miR-208b mimics的VSMCs与对照组相比,miR-208b表达水平显著增加,而ALP的活性、OC的分泌量、矿化结节量及Runx2蛋白的表达水平均明显下降。结论:过表达的miR-208b会抑制VSMCs向成骨样细胞分化。miR-208b表达水平的下调和Runx2蛋白表达水平的上调在p-GP诱导的VSMCs向成骨样细胞分化过程中发挥了重要作用。miR-208b可能是VSMCs向成骨样细胞分化过程中的重要调节因子。