红树植物老鼠勒多糖提取工艺优化、纯化制备及其抗氧化活性的研究

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植物多糖是天然非细胞毒性的活性成分,越来越多地被用作传统药物的替代品,以减少自由基诱导的氧化应激的影响。然而,在提取过程中提高其产量和生物活性仍然是一个挑战,因为大多数提取方法都有可能降解多糖,从而影响其生物活性。因此,为了提高产量和增强多糖的抗氧化能力,本文探索了红树植物老鼠勒多糖的超声辅助提取工艺,主要包括(i)对比热水和超声波辅助提取多糖的得率及其抗氧化活性;(ii)通过响应面方法优化提取参数,以提高超声辅助提取的性能;(iii)从粗提取物中获得纯多糖。最后,对纯化的多糖的理化、微观结构和体外抗氧化能力进行了评价。所得到的主要结论如下:(1)超声辅助提取从老鼠勒中提取粗多糖的优化研究。该研究调查了超声辅助提取和热水提取对红树植物老鼠勒多糖产量的影响。单因素实验结果表明,对提取率贡献最大的因素是:超声功率、萃取温度、超声时间和液固比。将RSM应用于重要因素,优化范围为:超声波功率60-150 W,提取温度40-60 oC,超声波时间30-70min,液料比20:1-40:1 ml/g。超声辅助条件设置为超声功率为150 W,温度53o C,时间50 min,液固比为35:1(ml/g),超声辅助条件显著提高,老鼠勒多糖的最大提取率为2.46%±0.43%,与常规热水提取方法(1.28±0.29%)相比有显著改善。(2)热水和超声辅助提取老鼠勒粗多糖的结构差异和抗氧化活性研究发现,超声辅助提取(UAE-ACI)提取的粗多糖的总碳水化合物含量较低,为41.46%,蛋白含量高于HWE-ACI(分别为54.96%w/w和7.51%w/w)。UAE-ACI和HWE-ACI含有相同的D-葡萄糖、D-阿拉伯糖和D-半乳糖单糖组成,但葡萄糖百分比为59.01%,高于热水提取的40.99%。UAE-ACI在50.65 k Da(28.78%),1.28 k Da(71.22%)处2个多糖吸收峰;HWE-ACI有了2个多糖吸收峰,分别为47.67 k Da(28.74%)和1.39(7.26%)。UAE-ACI和HWE-ACI在260 nm处无吸收峰;两者的FT-IR光谱相似,含有提取的多糖中含有的特征峰。UAE-ACI和HWE-ACI不含淀粉;与HWE-ACI相比,UAE-ACI含GAE为0.132 g/g,含GAE为0.096g/g,酚含量为7.1×10-4 g QE/g,类黄酮含量为4.3×10-4 g QE/g,酚类和类黄酮含量更高。UAE-ACI和HWE-ACI均显示出抗氧化能力。UAE-ACI和HWE-ACI的DPPH自由基清除能力分别在8 mg/m L下DPPH自由基清除率最大,分别为79.67%和74.22%(EC50 0.51 mg/m L和0.58mg/m L);羟基清除活性分别达到80.72%和70.95%(EC50 0.10 mg/m L和1.25mg/m L);超氧自由基清除率分别为58.21%和69.78%;ABTS自由基清除率分别为81.2%和68.1%,表明UAE-ACI具有更强的清除能力。(3)进一步研究了老鼠勒多糖的结构组成和抗氧化活性。纯化超声辅助提取(UAE-ACI)提取粗多糖,获得了5种组分,即UAE-ACI-A,UAE-ACI-b,UAE-ACI-c,UAE-ACI-d,UAE-ACI-e。其中,UAE-ACI-a具有最高的峰值,进一步纯化得到组分UAE-ACI-1和UAE-ACI-2。HPSEC分析表明,UAE-ACI-2是一种均质多糖,分子量为198k Da。UAE-ACI-2主要由葡萄糖,半乳糖,木糖和阿拉伯糖组成。紫外光谱、FTIR和NMR解析其结构。FTIR的光谱表明,UAE-ACI-2-2吡喃糖的糖环通过α构型糖苷键连接。核磁共振光谱在UAE-ACI-2中的化学位移为5.288 ppm,表明UAE-ACI-2的糖环是吡喃糖环,而UAE-ACI-2的糖残基通过α构型糖苷键连接。抗氧化活性测定结果表明,UAE-ACI-2的DPPH自由基清除活性在5mg/m L时具有43.2%的最大清除活性。UAE-ACI-2的羟基清除活性达到30.95%(EC50 0.10 mg/m L)的最高水平。对于ABTS自由基,6 mg/m L的AVEY-ACI-2清除活性为31.21%,EC50值为1.89 mg/m L。与粗多糖相比,UAE-ACI-2的抗氧化活性较低,可能因为其它结合物也对其抗氧化活性产生的贡献。
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