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单增李斯特菌（Listeria monocytogenges,Lm）是在环境中普遍存在的革兰氏阳性腐生菌,同时也是重要的食源性病原菌,可导致人兽共患病——李斯特菌病（listeriosis）。Lm对环境抵抗力强,能够耐受低温和胆盐,可以形成生物被膜,是食品贮存和加工场所的重要污染来源。细菌双组分信号转导系统（Two-Component Signal Transduction System,TCS）负责感应环境信号刺激并调控菌体相关基因表达以适应环境变化而生存。研究Lm的TCS能为揭示Lm的生存和致病机理提供重要信息。本研究以Lm食品分离株LM201为研究材料,通过对其全基因组分析获知RS08195/RS08200这两个相邻基因编码一对TCS。目前在Lm中直接针对该TCS的研究还鲜有报道。本研究以RS08195/RS08200为研究对象,通过构建缺失突变株和测定突变株的表型以及转录组测序分析,初步了解了RS08195/RS08200对Lm在不同环境下的生存能力的影响和对小鼠毒力的影响。1.RS08195/RS08200的生物信息学分析通过结构域分析获知,RS08195编码了应答调控子（Response Regulator,RR）,其N端为磷酸受体结构域REC,C端结构域为ANTAR,属于AmiRNasR型转录抗终止调控子结构域。RS08200编码的是个组氨酸激酶（Histidine Kinase,HK）,其N端无跨膜螺旋区,C端为典型结构域HATPasec。氨基酸序列比对分析结果显示,RS08195与同种同血清型菌株F2365中的RS05895以及与同种不同血清型菌株EGD-e中的lmo1172所编码的氨基酸序列一致性（identity）均达100%。RS08200与F2365的RS05900以及与EGD-e的lmo1173所编码的氨基酸序列一致性分别为100%和99%。EGD-e的lmo1172/lmo1173编码的双组份名为EutVW,故本研究将RS08195/RS08200编码的双组份也命名为EutVW。2.构建RS08195/RS08200缺失株和回复株以LM201为亲本株,利用自杀性温敏穿梭载体pHT304-ts,通过同源双交换法,将RS08195/RS08200两个基因同时敲除,获得了双缺失突变株S6004。通过扩增RS08195/RS08200基因,将其连接于表达载体pHT304,构建出了重组质粒p5003。将p5003转入缺失株S6004,获得了回复株S6006。3.缺失株S6004的生物学特性测定在生长速率测定、常规生化反应和氧化应激能力测定中,S6004与亲本株LM201相比,均为无显著差异。在溶血性测定中,亲本株溶血效价为24,S6004的为26。在生物被膜形成能力（37℃）和在牛奶中的增殖能力测定中,S6004与亲本株相比,均为显著降低（P<0.05）。上皮细胞Caco-2的黏附和侵袭试验、RAW264.7细胞的吞噬试验,以及线虫毒力试验结果显示,S6004与亲本株相比,无显著差异。小鼠LD50的测定结果显示,亲本株的LD50为9.31×104 CFU,S6004的为2.36×105CFU,通过非配对实验设计统计学分析可知,S6004的毒力下降差异不显著（t<2.2281）。小鼠组织载菌量测定结果显示,在肝脏中,S6004与亲本株的细菌量无显著差异;在脾脏中,S6004在24h时,细菌量比亲本株的显著减少（P<0.05）。4.转录组测序分析基因差异表达分析结果显示,与亲本株相比,S6004有115个基因表达量上调,98个基因表达量下调。其中,eut操纵子上的eutG和agrC（双组分AgrAC的HK）的基因表达下调,dltB,dltC和dltD这3个依赖VirR调控的毒力基因表达下调,hly、inlA和inlH这3个依赖PrfA调控的毒力基因表达上调。差异基因GO富集分析结果显示,富集到分子功能分支的差异基因最多。本研究缺失的RR基因RS08195与双组分AgrAC的HK基因agrC共同被富集到多个GO terms中,说明RS08195/RS08200编码的TCS与AgrAC之间有关联。KEGG-Pathway富集结果显示,差异表达基因主要被富集到氨基酸代谢通路和营养代谢通路中。其中,3个表达下调的基因agrB、agrC和frdA被富集到TCS通路中。agrB和agrC是agr操纵子上的基因,与双组份AgrAC密切相关,AgrAC在Lm中参与调控生物被膜形成。frdA编码的蛋白参与氮代谢相关双组份的调控。说明RS08195/RS08200编码的TCS与Agr和FrdA有关联。